معلومة

شذوذ في نمو الفطر في مرق البطاطس دكستروز ... العكارة لا تظهر في قارورة واحدة

شذوذ في نمو الفطر في مرق البطاطس دكستروز ... العكارة لا تظهر في قارورة واحدة


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

لقد قمت بتلقيح ستة قوارير سعة 200 مل من مرق دكستروز البطاطس ، أحدها لا يظهر أي عكارة والوسط صافٍ بداخله قرص فطري.

تم تلقيح جميعهم في نفس الوقت ومن نفس ثقافة الفطريات النقية.

ما قد يكون سبب هذا الشذوذ؟


يمكن تصور عدة تفسيرات. يمكن أن تساعد معرفة نوع الفطريات التي تعمل معها وكيف بدأت في تلقيح الثقافات في تضييق نطاق الاحتمالات.

فيما يلي بعض التفسيرات المحتملة:

  • نظرًا لأنك قمت بتلقيح ستة مزارع سائلة من نفس ثقافة المخزون ، فقد تكون العملية طويلة جدًا. دعني أشرح. معظم الفطريات عبارة عن أيروبس بشكل صارم ولا تتسامح مع نقص الأكسجين بشكل جيد. لذا ، كما أستطيع أن أخمن ، بينما كنت تقوم بتلقيح مرق الدكستروز واحدًا تلو الآخر ، ظلت ثقافة المخزون غير مهواة على مقعدك. نظرًا لأن الأمر قد يستغرق بضع عشرات من الدقائق لتحضير كل شيء والمضي قدمًا في التطعيم ، فمن الممكن أنه أثناء قيامك بذلك ، استمرت الحالة الفيزيولوجية للفطريات في التدهور ، لدرجة أن إحدى التطعيمات الأخيرة حدثت لا تحتوي على خلايا قابلة للحياة كافية لبدء نمو في المرق.
  • ربما نسيت هز مخزون المرق قبل أخذ العينة المستخدمة لتلقيح المرق. لذلك من الممكن أن تكون كل الكتلة الحيوية في مزرعة المخزون قد تم ترسيبها وقمت للتو بتلقيح مرقك بالمادة الطافية.
  • أيضًا ، الخطأ الكلاسيكي هو خلط بعض مرقك. تعتقد أنك قمت بتلقيح جميع المرق الستة بثقافة المخزون ، لكن ربما تكون قد تخطيت عن غير قصد واحدًا ، أو ربما قمت بتلقيح نفس المرق مرتين.

شذوذ في نمو الفطر في مرق البطاطس دكستروز ... العكارة لا تظهر في قارورة واحدة - علم الأحياء

تهدف هذه الدراسة إلى وصف توصيف Paenibacillus polymyxa GBR-1 (GBR-1) فيما يتعلق بآثاره الإيجابية والسلبية على النباتات.

أساليب

تم تحديد الخصائص المورفولوجية لـ GBR-1 بواسطة الفحص المجهري ، وخضعت للتحليل البيولوجي لتحديد الهوية. تم تحديد عدد البكتيريا وتحسين الوسائط من خلال منحنى النمو. تم تقييم احتمالية GBR-1 كعامل محفز للنمو ، وأن يكون لها نشاط مضاد ، وأن يكون لها نشاط مائي في درجات حرارة مختلفة. تم تقييم تزاوج GBR-1 مع الكائنات الحية الدقيقة الأخرى ومدى إمراضه في العديد من النباتات المخزنة ، بما في ذلك الجينسنغ.

نتائج

تم تحديد مورفولوجيا المستعمرة والخلايا الحاملة للأبواغ والانقسام الخلوي لـ GBR-1 عن طريق تحديد الفحص المجهري من خلال استخدام النظام البيولوجي ، كروماتوجرافيا الغاز لاسترات ميثيل الأحماض الدهنية (GC-FAME). أظهر GBR-1 أقوى نشاط مضاد لمسببات الأمراض الفطرية والبكتيرية. كانت أرقام خلايا GBR-1 أعلى نسبيًا عندما تمت زراعة الخلايا في وسط ضخ قلب الدماغ (BHI) عند مقارنتها بالوسائط الأخرى. علاوة على ذلك ، تأثر نشاط التحلل المائي للنشا بـ GBR-1 عند درجة حرارة أعلى مقارنة بدرجات الحرارة المنخفضة. كانت GBR-1 مسببة للأمراض لبعض محطات التخزين. يتسبب التلقيح المشترك لـ GBR-1 مع مسببات الأمراض الأخرى في حدوث اختلافات في تعفن جذور الجينسنغ. لوحظ وجود تعزيز كبير للنمو في شتلات التبغ المعالجة بمعلقات GBR-1 تحت في المختبر الظروف ، مما يشير إلى أن المركبات العضوية المتطايرة (VOCs) قد تلعب دورًا في تعزيز النمو.

استنتاج

تشير نتائج هذه الدراسة إلى أن GBR-1 له تأثيرات إيجابية وسلبية على جذر الجينسنغ والنباتات المخزنة الأخرى كعامل تحكم بيولوجي محتمل واستنباط في المختبر تعزيز النمو.


في المختبر نمو و microcycle conidiation من Idriella Bolleyi، عامل المكافحة الحيوية لمسببات أمراض الحبوب

الحد الأدنى من المتطلبات الغذائية لنمو Idriella (= ميكرودوشيوم) بوليلي في الثقافة السائلة المهتزّة كانت الأملاح المعدنية ، نترات النيتروجين ، الجلوكوز والثيامين. تم عرض حركيات الثقافة الدفعية النموذجية في هذا الوسط وتم تقييمها بواسطة تعكر الثقافة عندما تم استخدام ألجينات الصوديوم للحث على النمو بواسطة الفطريات المشتتة. تم إنتاج Conidia خلال النمو الأسي ووصل إلى أقصى عدد (كاليفورنيا 6 × 10 7 مل -1) عن طريق التباطؤ أو المرحلة الثابتة المبكرة. عند تطبيق معادلة Monod على معلمات المزرعة عند تركيزات مختلفة من الجلوكوز ، تم حساب الحد الأدنى لوقت المضاعفة في وسط الجلوكوز-نترات-الثيامين عند 25 درجة مئوية بين 5-25 و 6 · 1 ساعة ، و كس (تركيز الركيزة المحدد بنصف معدل النمو النوعي الأقصى) كان بين 0 · 049 و 0 · 077٪ جلوكوز.

كان الإنبات Conidial يعتمد على الأكسجين ولكنه لا يتطلب مغذيات. على أجار الماء أو أجار الجلوكوز بنسبة 0 1٪ ، تنبت معظم الجراثيم بواسطة أنابيب جرثومية ، ولكن ما يصل إلى 15٪ من الجراثيم تتضخم وتنتج المزيد من الكونيديا (2-5) من أحد قطبي البوغ الأصلي أو كليهما. تم قمع كونيدات الدورة الصغيرة هذه عند مستويات الجلوكوز المرتفعة. تمت مناقشة النتائج فيما يتعلق بإنتاج لقاح المكافحة الحيوية وكفاءة أنا بوليلي في المكافحة الحيوية على الجذور.

العنوان الحالي: Benaki Phytopathological Institute، Ekalis 2، 145 61 Kiphissia، Athens، Greece.


الملخص

تتوخى الدراسة الحالية الإنتاج البيولوجي لجسيمات الفضة النانوية باستخدام أوكسيسبوروم الفيوزاريوم و في السيليكو تحديد النشاط المضاد للبكتيريا للجسيمات النانوية باستخدام دراسات تفاعل البروتين - الترابط. كان شكل الجسيمات النانوية متغيرًا ، حيث كان معظمها كرويًا في نطاق يتراوح من 1 إلى 50 نانومتر. ل في السيليكو دراسات اثنين من الكائنات الحية الدقيقة ، الإشريكية القولونية و الزائفة الزنجارية تم اختيار الإرساء المعدني وتم تنفيذ الإرساء المعدني باستخدام البرنامج المرخص SYBYL X 1.1.1. رست الرابطة بعمق في الجيوب الملزمة لبروتينات الغشاء الخارجي (OMPs) لكليهما بكتريا قولونية و P. الزنجارية. أظهرت النتائج أن الفضة قد تكون عاملًا قويًا مضادًا للبكتيريا ضد مسببات الأمراض ، حيث يكون التأثير المضاد للبكتيريا للفضة أكبر في حالة P. الزنجارية. النتائج التي تم الحصول عليها من خلال في السيليكو تم التحقق من صحة مزيد من الدراسات بواسطة في المختبر على كل من الوسائط الصلبة والسائلة لتأكيد النتائج التي تم الحصول عليها بواسطة في السيليكو التحليلات. التأييد في السيليكو و في المختبر توضح النتائج بإسهاب الإمكانات الهائلة المضادة للبكتيريا لجسيمات الفضة النانوية ضد مسببات الأمراض المختارة.


غربلة البكتيريا عالية الأداء المنتجة للمواد الندفية وتحسين ظروف التلبد لمياه الصرف الصحي لتقطير القمح

هدفت هذه الدراسة إلى غربلة البكتيريا عالية الأداء المنتجة للمواد الندفية من أجل تلبد المادة العالقة في مياه الصرف الصحي لتقطير القمح. بعد الفرز الأولي والثانوي ، تم فحص سلالة بكتيرية عالية الأداء منتجة للمواد الندفية من الحمأة المنشطة لمياه الصرف الصحي لتقطير القمح. تم استخدام التجارب المتعامدة والعامل الفردي لتحسين الثقافة والظروف النضارية للبكتيريا المنتجة للندف. سلالة متفوقة من كليبسيلا تم فحص M1 وتحديده بواسطة 16S rDNA. كانت درجة التلبد الأولية تصل إلى 72٪. بناءً على اختبارات العامل الفردي ، كانت ظروف الندب المثلى هي وقت الراحة لمدة 30 دقيقة ، و 8 ٪ (حجم / حجم) جرعة متوسطة الثقافة ، و 3 ٪ (حجم / حجم) CaCl2. كانت ظروف الاستزراع المثلى هي درجة حرارة حضانة 30 درجة مئوية لمدة 48 ساعة عند درجة حموضة 4.5 وسرعة دوران 150 دورة في الدقيقة. في ظل الظروف المثلى ، كانت درجة التلبد تصل إلى 82٪. كانت أفضل مكونات وسط التخمير هي 15 جم / لتر جلوكوز و 2 جم / لتر ببتون و 1 جم / لتر KH2PO4 و 2.5 جم / لتر K2HPO4. كما تم تحقيق درجة عالية من التلبد مع متوسط ​​التكلفة المنخفضة. يمكن استخدام سلالة بكتيريا Klebsiella M1 باعتبارها بكتيريا بيولوجية منتجة جيدة لمياه الصرف الصحي لتقطير القمح.

المادة كاملة

غربلة البكتيريا عالية الأداء المنتجة للمواد الندفية وتحسين ظروف التلبد لمياه الصرف الصحي في معمل تقطير القمح

Huan Diao و a و b Lvmu Li و a و c و * Jun Liang و a Xiaoling Ding c

هدفت هذه الدراسة إلى غربلة البكتيريا عالية الأداء المنتجة للمواد الندفية من أجل تلبد المادة العالقة في مياه الصرف الصحي لتقطير القمح. بعد الفرز الأولي والثانوي ، تم فحص سلالة بكتيرية عالية الأداء منتجة للمواد الندفية من الحمأة المنشطة لمياه الصرف الصحي لتقطير القمح. تم استخدام التجارب المتعامدة والعامل الفردي لتحسين الثقافة والظروف النضارية للبكتيريا المنتجة للندف. سلالة متفوقة من كليبسيلا تم فحص M1 وتحديده بواسطة 16S rDNA. كانت درجة التلبد الأولية تصل إلى 72٪. استنادًا إلى اختبارات العامل الواحد ، كانت الظروف المثلى للنضارة هي وقت الراحة لمدة 30 دقيقة ، و 8 ٪ (حجم / حجم) جرعة متوسطة الثقافة ، و 3 ٪ (ت / ت) CaCl2. كانت ظروف الاستزراع المثلى هي درجة حرارة حضانة 30 درجة مئوية لمدة 48 ساعة عند درجة حموضة 4.5 وسرعة دوران 150 دورة في الدقيقة. في ظل الظروف المثلى ، كانت درجة التلبد تصل إلى 82٪. كانت أفضل مكونات وسط التخمير هي 15 جم / لتر جلوكوز ، 2 جم / لتر ببتون ، 1 جم / لتر KH2ص4، و 2.5 جم / لتر كلفن2HPO4. كما تم تحقيق درجة عالية من التلبد مع متوسط ​​التكلفة المنخفضة. ال كليبسيلا يمكن استخدام سلالة البكتيريا M1 باعتبارها بكتيريا بيولوجية منتجة جيدة لمياه الصرف الصحي لتقطير القمح.

الكلمات الرئيسية: Bioflocculants Bioresources Biores المقطر القمح مياه الصرف الصحي Klebsiella spp. تحسين الفحص

معلومات الاتصال: أ: كلية الحياة والعلوم ، جامعة آنهوي الزراعية ، خفي ، آنهوي ، 230036 ، الصين ب: كلية الصيدلة ، جامعة أنهوي شينهوا ، خفي آنهوي ، 230088 ، الصين ج: كلية علوم وتكنولوجيا الحيوان ، جامعة آنهوي الزراعية ، خفى ، آنهوي ، 230036 ، الصين

* المؤلف المراسل: [email protected]

المقدمة

Anhui Ruifuxiang Food Co. Ltd هي أكبر شركة في الصين تنتج الكحول من القمح. يبلغ إنتاج مياه الصرف الصحي اليومية حوالي 3000 طن. يصل تركيز الطلب الكيميائي للأكسجين في مياه الصرف الصحي إلى 50000 مجم / لتر. يبلغ محتوى المواد الصلبة العالقة (SS) ما يقرب من 10000 مجم / لتر ، ويبلغ تركيز النيتروجين الكلي حوالي 1000 مجم / لتر. المكونات الرئيسية لـ SS هي 6 ٪ إلى 7 ٪ من إجمالي المواد الصلبة العالقة ، وحوالي 3 ٪ بروتين ، و 1.5 ٪ إلى 2.5 ٪ بنتوزان ، و 2 ٪ إلى 3 ٪ خميرة ، عند درجة حموضة من 3.2 إلى 4. بعض خصائص مياه الصرف الصحي هي ارتفاع في درجة الحرارة ، وحموضة عالية ، وتركيز عالٍ ، ولزوجة عالية ، وعدد قليل من الجزيئات المعلقة. في الوقت الحاضر ، تستخدم هذه الشركة بشكل أساسي المواد الكيميائية الندفية ، مثل بولي أكريلاميد (PAM) ، والتي يتم دمجها مع تعويم الهواء والتخمير اللاهوائي لمعالجة مياه الصرف الصحي. تبلغ كمية PAM المستخدمة حوالي 10 جزء في المليون إلى 15 جزء في المليون ، وتبلغ تكلفة معالجة المواد الندفية حوالي 0.2 يوان / طن من مياه الصرف الصحي. تأثير العلاج PAM أكثر فعالية من المواد الندفية الكيميائية الأخرى. ومع ذلك ، فإن مونومر الأكريلاميد المتبقي هو سم عصبي ، يمكن أن يسبب تسممًا عصبيًا ، وقد يظهر الأفراد المصابون بالسرطان أعراض الضعف والرنح (يوكوي) وآخرون. 1997 Rudén 2004). لذلك ، من الضروري تطوير مادة ندف خضراء آمنة وفعالة لا تنتج التلوث الثانوي. بسبب البراءة والكفاءة العالية والطبيعة الخضراء الصديقة للبيئة لمواد الندف الميكروبية (bioflocculant) ، فقد اجتذبت اهتمامًا كبيرًا من مجتمع البحث العلمي (Liu وآخرون. 2013). المكورات الحيوية ، التي يتم الحصول عليها من خلال التخمير بالبكتيريا أو الفطريات في ظل ظروف استزراع فريدة ، واستخلاص وصقل ، هي منتج استقلابي تنتجه الكائنات الحية الدقيقة أو إفرازاتها. تتكون المادة الحيوية من بوليمرات تمتلك نشاط التلبد الذي يمكن أن يتحد مع الملوثات في مياه الصرف الصحي ثم يولد الرواسب المراد ترشيحها (Vijayalakshmi and Raichur 2003). أظهرت معظم الدراسات أن المكونات الأساسية للتلوث الحيوي هي السكريات والبروتينات (Liu وآخرون. 2009). معظمهم من السكريات (Luo وآخرون. 2014). تم استخدام المكروبات الحيوية لمعالجة العديد من أنواع مياه الصرف الصحي ، مثل الطعام والطباعة والصباغة والمعادن والحليب (وانج وآخرون. 2007 أوكاييتو وآخرون. 2015). ومع ذلك ، لم يتم إجراء دراسة البكتيريا المتدفقة الميكروبية على مياه الصرف الصحي المقطرة للقمح. نظرًا لأن قدرة البكتيريا على التلبد يمكن أن تُظهر خصوصية قوية لأنواع مختلفة من مياه الصرف الصحي ، فمن الضروري مراعاة العديد من البكتيريا المنتجة لمواد الندف. (Agunbiade وآخرون. 2017 لي وآخرون. 2017). تم فحص سلالات بكتيرية عالية الأداء منتجة للمواد الندفية لإنتاج مادة حيوية من مياه الصرف الصحي المقطرة للقمح ، والتي تم اختيارها كمواد خام ، وتم تحسين ظروف التلبد والاستزراع لتطوير عملية تنقية خضراء عالية الكفاءة لمياه الصرف الصحي المقطرة للقمح.

هناك العديد من العوامل التي تؤثر على إنتاج ونشاط التندف للكائنات الحيوية ، مثل تكوين وسط الاستزراع ، وظروف استنبات البكتيريا ، وظروف التلبد (لو وآخرون. 2014). يعد تحسين الظروف المذكورة أعلاه مفيدًا لتأثير التلبد للعامل الحيوي. كوران وآخرون. (1986) ذكر أنه عندما كانت درجة حرارة المزرعة المثلى 30 ℃ ، كانت كمية المكروبات الحيوية ونمو الخلية أعلى مرتين من 25 ℃ و 37. عندما كانت قيمة الأس الهيدروجيني الأولية 9.5 ، كان معدل نمو الخلية أعلى من الرقم الهيدروجيني 7. أظهر Zhao and Liu (2008) أنه في ظل ظروف الاستزراع المثلى (الرقم الهيدروجيني = 12 ، درجة حرارة الثقافة = 30 ℃ ، سرعة الدوران = 150 دورة في الدقيقة ، ووقت الحضانة = 74 ساعة) ، كانت كمية المادة الحيوية هي الأعلى ، حتى 95.0٪ ، والتي كانت أعلى من تلك الخاصة بالمجموعة الضابطة). يانغ وآخرون. (2009) أظهر أن كمية المكورات الحيوية المضافة ، ودرجة الحموضة ، ومساعدات التخثر (CaCl2) ، وسرعة الخلط لها تأثير كبير على درجة التلبد. يعتبر الكربون والنيتروجين والأملاح غير العضوية من العوامل الرئيسية لتحديد تكلفة وسط الاستزراع. يؤثر الحصول على أفضل مصادر الكربون والنيتروجين وأفضل نسبة فوسفات في مزرعة بكتيرية متدفقة على نمو الخلايا وإنتاج المواد الحيوية ، ويؤدي إلى انخفاض تكلفة وسط الاستزراع (Chen وآخرون. 2013 مورثي وبرافين 2013 تشاو وآخرون. 2013 ب).

عملت هذه الدراسة على تحسين ظروف الاستزراع التقليدي ومصدر الكربون ومصدر النيتروجين ونسبة الفوسفات. تم تحديد مصدر الكربون الأمثل باستخدام الجلوكوز والسكروز واللاكتوز والمالتوز والنشا. تم تحديد مصدر النيتروجين الأمثل باستخدام توليفات نيتروجين مفردة أو متعددة من مستخلص اللحم البقري ونترات الصوديوم واليوريا وكبريتات الأمونيوم والببتون. تم الحصول على جرعة الفوسفات غير العضوية المثلى من خلال تحديد أفضل نسبة من فوسفات هيدروجين البوتاسيوم (KH2ص4) وفوسفات هيدروجين البوتاسيوم (K.2HPO4).

التجريبية

مصدر عزل السلالة وثقافة الإعلام

قدمت شركة Anhui Ruifuxiang Food Co. Ltd (مدينة HeFei ، مقاطعة Anhui ، الصين) بقايا تقطير الكحول والحمأة المنشطة ، والتي تم استخدامها في مواد الفرز.

يتكون وسط التخمير من 20 جم من الجلوكوز (Aladdin Industrial Corporation ، شنغهاي ، الصين) ، 0.5 جم من مستخلص الخميرة (Beijing AOBOX Biotechnology Corporation ، بكين ، الصين) ، 5.0 جم من K2HPO4 (Xilong Scientific Corporation ، قوانغدونغ ، الصين) ، 2.0 جرام من KH2ص4 (Xilong Scientific Corporation ، قوانغدونغ ، الصين) ، 0.2 جم من MgSO4 (Aladdin Industrial Corporation ، شنغهاي ، الصين) ، 0.1 جرام من كلوريد الصوديوم (Hangzhou Microbial Reagent Co. ، LTD ، هانغتشو ، الصين) ، 0.1 جرام من كبريتات الأمونيوم (Aladdin Industrial Corporation ، شنغهاي ، الصين) ، و 0.5 جرام من اليوريا (Xilong) المؤسسة العلمية ، قوانغدونغ ، الصين).

يحتوي وسط الاستزراع البكتيري (وسط زراعة بكتيريا حمض اللاكتيك: MRS) على 10.0 غرام من الببتون (Aladdin Industrial Corporation ، شنغهاي ، الصين) ، 10.0 غرام من مستخلص اللحم البقري (Hangzhou Microbial Reagent Co. ، LTD ، Hangzhou ، الصين) ، 5.0 غرام من مستخلص الخميرة (Beijing AOBOX Biotechnology Corporation ، بكين ، الصين) ، 2.0 جرام من حامض الستريك ثنائي هيدروجين ثنائي الأمونيوم (Xilong Scientific Corporation ، Guangdong ، الصين) ، 20.0 جرام من الجلوكوز (Aladdin Industrial Corporation ، شنغهاي ، الصين) ، 1.0 مل من Tween 80 ( شركة Tianjin Zhiyuan Chemical Reagents Co.، Ltd. ، polyoxyethylene (20) sorbitan monooleate) ، 5.0 جرام من أسيتات الصوديوم (Xilong Scientific Corporation ، Guangdong ، الصين) ، 2.0 جرام من K2HPO4· 3 ح2O (Xilong Scientific Corporation ، Guangdong ، الصين) ، 0.58 جم من MgSO4· 7 ح2O (Xilong Scientific Corporation ، Guangdong ، الصين) ، 0.25 جم من MnSO4· ح2O (Xilong Scientific Corporation ، Guangdong ، الصين) ، و 18.0 جرام من أجار (Hangzhou Microbial Reagent Co. ، LTD ، Hangzhou ، الصين). تراوح الأس الهيدروجيني من 6.2 إلى 6.6.

يحتوي وسط الاستزراع البكتيري (Nutrient Broth: NB) على 5 جم من مستخلص اللحم البقري (Hangzhou Microbial Reagent Co. ، LTD ، Hangzhou ، الصين) ، 5 جم من كلوريد الصوديوم (Xilong Scientific Corporation ، Guangdong ، الصين) ، و 10 جم من الببتون. (Aladdin Industrial Corporation ، شنغهاي ، الصين) ، وكان لها درجة حموضة محايدة.

يتكون وسط استزراع الفطر (Potato Dextrose Agar Medium: PDA) من 200 جرام من البطاطس (سوبر ماركت ، Hefei ، الصين) ، 20 جرامًا من الجلوكوز (Aladdin Industrial Corporation ، شنغهاي ، الصين) ، وحوالي 15 جرامًا إلى 20 جرامًا من أجار. (Hangzhou Microbial Reagent Co. ، LTD ، هانغتشو ، الصين) ، وكان لها درجة حموضة محايدة.

فحص البكتيريا المنتجة للندف

الفحص الأولي: تم أخذ عينات من 1 جم من الحمأة المنشطة و 1 جم من بقايا تقطير الكحول من شركة إنتاج كحول القمح ثم إضافتها إلى الماء المقطر المعقم مع العديد من الخرز الزجاجي المعقم لتفريق الخلايا الدقيقة البكتيرية في خلايا مفردة. تمت إضافة 1 مل معلق خلية واحدة إلى وسط ثقافة التخصيب 99 مل من MRS السائل ، NB ، و PDA واحتضانها عند 30 درجة مئوية و 37 درجة مئوية ، على التوالي ، وتدويرها عند 150 دورة في الدقيقة لمدة 48 ساعة. تم تخفيف الوسائط السائلة بالماء المقطر. تم طلاء أطباق بتري بالفطر ووسط أجار الفصل البكتيري بـ 0.1 مل من السائل المخفف. تمت زراعة وسط الفصل لمدة 48 ساعة ، وتم ملاحظة خصائص الطائفة. تم اختيار وتنقية المستعمرات الملساء والكبيرة واللزجة باستخدام تقنية لوحة الخطوط (Guo 2013). تم تخزين السلالات المفحوصة في الثلاجة عند 4 درجات مئوية.

الفحص الثانوي: تم تلقيح السلالات التي تم الحصول عليها من الفحص الأولي في 100 مل من وسط التخمير القياسي وتم تربيتها عند درجة حرارة الغربلة المقابلة وسرعة الدوران البالغة 150 دورة في الدقيقة لمدة 24 ساعة. تم قياس أداء الندف عن طريق اختبار درجة التلبد لمياه الصرف الصحي لتقطير القمح (Yang وآخرون. 2015) ، ثم تم اختيار سلالات إنتاج المواد الندفية عالية الكفاءة.

تحديد الأنواع عن طريق البيولوجيا الجزيئية

تم تسلسل السلالات البكتيرية التي تم فحصها بواسطة 16S rDNA. تم الانتهاء من عمل التوليف والتسلسل التمهيدي بواسطة Sangon Biotech Co.، Ltd. (شنغهاي ، الصين). وفقًا لنتائج 16S rDNA المتسلسلة ، تم محاذاة تسلسل النيوكليوتيدات مع قاعدة بيانات NCBI ، وتم تحديد الأنواع التي تم فحصها. تم استخراج تسلسل الجين 16S rDNA لبعض السلالات من Genbank وتم رسم شجرة النشوء والتطور للسلالة باستخدام طريقة NJ في برنامج MEGA 4 (مركز معهد الجينوم الوظيفي التطوري الحيوي ، جامعة ولاية أريزونا ، تيمبي ، أريزونا ، الولايات المتحدة الأمريكية) .

تم ملء خمسة إلى ستة فروع بـ 6 مل من الوسط الطازج لتشكيل ثقافة المنحدرات ، وتم طلاء أكبر عدد ممكن من السلالات على المنحدر الكامل لسلالات الحصاد. تم إرسال البكتيريا المعبأة بالبريد إلى مركز مجموعة الثقافة الصينية (ووهان ، الصين) لحفظها.

تحديد منحنى النمو للسلالة

تم تلقيح السلالة المنقاة في وسط استزراع 150 مل ، وقيمة الامتصاص عند 600 نانومتر (OD600) تم قياسه. مرق الثقافة درجة الحموضة والكتلة الحيوية و OD600 تم تحديد القيم عند درجة حرارة الغربلة البالغة 37 درجة مئوية وبسرعة دوران ثابتة تبلغ 150 دورة في الدقيقة. تم جمع العينات كل 6 ساعات. تم استخدام وسط غير ملقح كمجموعة تحكم. تم رسم منحنى النمو مع وقت الاستزراع مثل الإحداثي و OD600 القيمة الإحداثي (Xing وآخرون. 2010).

تحديد درجة التلبد

تم تحديد نشاط التلبد عن طريق قياس درجة التلبد لمياه الصرف الصحي لمعمل تقطير القمح. طريقة تحديد درجة التلبد: تمت إضافة 5 مل من مرق الثقافة إلى قوارير مثلثة مع 100 مل من مياه الصرف الصحي المقطرة للقمح للخلط في درجة حرارة الغرفة. تذبذب الدورق الثلاثي بسرعة لمدة 3 دقائق (120 دورة في الدقيقة) ، وتذبذب ببطء لمدة دقيقتين (50 دورة في الدقيقة) ، ثم استراح لمدة 10 دقائق. أخيرًا ، تم جمع المادة الطافية لقياس قيمة الامتصاصية (OD780). تم استخدام الماء المقطر كمجموعة تحكم بدلاً من مرق الثقافة. تم حساب درجة التلبد لمياه الصرف الصحي بالمعادلة التالية (Li وآخرون. 2017),

الصورة 2. منحنيات النمو ودرجة الحموضة لسلالة M1

تحسين عامل واحد لظروف التلبد

أظهرت نتائج اختبار العامل الفردي وجود درجة تلبد أعلى مع فترات راحة أطول. ومع ذلك ، لم تتغير درجة التلبد بشكل ملحوظ لوقت الراحة أقل من 30 دقيقة. وفقًا لكفاءة الاختبار ، تم تحديد وقت الراحة الأمثل ليكون 30 دقيقة. النتائج موضحة في الشكل 3. أظهرت نتائج اختبار وقت الراحة أن درجة التلبد تزداد مع تمديد وقت الراحة ، نظرًا لوقت الراحة الطويل الذي يوفر فرصًا متعددة للجسيمات في معلق مياه الصرف لتتجمع وتزيد من درجة التلبد ( الشمراني وآخرون. 2002).

الشكل 6. توزيع المكونات النشطة الملبدة في سلالة M1. تمثل القيم الوسائل والانحرافات المعيارية ، ن= 3 تختلف القيم الموجودة في عمود بأحرف علوية مختلفة اختلافًا كبيرًا (p & lt0.01).

تحسين ظروف الثقافة

عامل واحد الأمثل لظروف الثقافة

مع زيادة وقت الثقافة ، زادت درجة التلبد للبكتيريا M1 تدريجياً.

الشكل 7. تأثير زمن الزرع على درجة التلبد. تمثل القيم الوسائل والانحرافات المعيارية ، ن=3.

عندما وصل وقت الحضانة إلى 48 ساعة ، كانت درجة التلبد لمحلول الاستزراع بمياه الصرف الصحي المقطرة للقمح تصل إلى 74.6٪. تظهر هذه النتيجة في الشكل 7. أشارت النتائج إلى أن المادة الحيوية كانت نتاج تخليق حيوي لـ M1 ، وليس ناتجًا عن التحلل الذاتي للخلية (Lu وآخرون. 2005). بعد وصول نشاط التلبد إلى الحد الأقصى ، أظهر نشاط التلبد ميلًا إلى الانخفاض. قد يرتبط هذا بتحلل مادة الندف في مرق التخمير ، أو نقص العناصر الغذائية اللازمة للكائنات الدقيقة اللاحقة (Li وآخرون. 2007).

يمكن أن نرى من الشكل 8 أن درجة التلبد زادت في خطوة زيادة درجة الحرارة الأولى (25 درجة مئوية إلى 30 درجة مئوية) ، ثم تميل إلى الانخفاض مع زيادة درجة الحرارة بشكل أكبر. كانت درجة التلبد لمياه الصرف الصحي المقطرة للقمح مرتفعة نسبيًا ، بالقرب من 75.5٪ ، عند 30 درجة مئوية. انخفضت درجة التلبد عندما كانت درجة حرارة المزرعة أعلى من 37 درجة مئوية. لا تؤثر درجة حرارة المزرعة على نمو الميكروبات والتمثيل الغذائي فحسب ، بل تؤثر أيضًا على نشاط الإنزيم في الخلايا الميكروبية (تشانغ وآخرون. 2002). تؤدي درجة الحرارة المرتفعة إلى انخفاض أو حتى فقدان نشاط الإنزيم في السلالة ، مما يؤثر على نمو واستقلاب السلالات ، ويسبب انخفاض درجة التلبد لسائل التخمير M1. تؤدي درجة الحرارة المنخفضة إلى إبطاء نمو السلالة وتقليل نشاط الإنزيم في الجسم الحي، وحتى يؤدي إلى تقليل المواد الندفية والمستقلبات الأخرى. وبالتالي يتم إطالة وقت تخليق مادة التلبد وتراكمها.

الشكل 8. تأثير درجة حرارة المزرعة على درجة التلبد. تمثل القيم الوسائل والانحرافات المعيارية ، ن=3.

نتائج التجربة المتعامدة الأمثل لظروف الثقافة

وفقًا لنطاق القيم الموضحة في الجدول 5 ، كان ترتيب العوامل ذات التأثير الأعلى على درجة التلبد كما يلي: A & gt D & gt B & gt C. كانت ظروف الاستزراع المثلى A2، ب2، ج1و د2, بمعنى آخر.، زمن الثقافة 48 ساعة ، درجة حرارة المزرعة 30 درجة مئوية ، درجة حموضة التخمير 5 ، وسرعة الدوران 150 دورة في الدقيقة. وفقًا لهذه الشروط ، كانت درجة التلبد تصل إلى 82.0٪ ، وكانت أعلى نتيجة اختبار التحقق المتعامد حوالي 81.8٪. أظهرت نتائج التجربة المتعامدة أن تأثير درجة حرارة الزراعة على درجة التلبد كان الأكبر.

نتائج الوسيط الأمثل

تجربة التحسين بعامل واحد

يلعب مصدر الكربون دورًا مهمًا في نمو الخلايا وتكوين المستقلبات. مصادر الكربون المختلفة لها تأثيرات مختلفة على درجة التلبد للبكتيريا. يوضح الشكل 11 أن تأثيرات اللاكتوز والمالتوز والنشا كمصادر الكربون على إنتاج بكتيريا M1 كانت بنفس الدرجة ، بينما كان للسكروز والجلوكوز تأثيرات أكثر أهمية من مصادر الكربون الأخرى. كانت درجة التلبد في مجموعة الجلوكوز هي الأعلى تليها مجموعة السكروز. مصدر الكربون هو أهم مصدر غذائي للكائنات الدقيقة وعنصر مهم في تكوين الهيكل الخلوي. مصدر الكربون هو عنصر مهم في الوسيط. يمكن لمصادر الكربون الرخيصة أن تقلل التكاليف بشكل فعال. تحت نفس التأثير ، يكون مصدر الكربون الأقل تكلفة هو الأفضل. في هذه التجربة ، كان الجلوكوز والسكروز متشابهين في السعر ، وتم اختيار الجلوكوز للتجارب اللاحقة لأنه يدعم درجة تراكم بيولوجي أعلى قليلاً. لذلك ، تم الحكم على الجلوكوز بأنه أفضل مصدر للكربون لسلالة M1.

الجدول 7. جدول تحليل التباين للاختبارات المتعامدة لمصدر الكربون ومصدر النيتروجين ونسبة الفوسفات في وسط الثقافة M1

الاستنتاجات

  1. بكتيريا عالية الفعالية منتجة لمواد الندف ، كليبسيلا M1 ، من الحمأة المنشطة ويمكن استخدامه كبكتيريا عالية الأداء منتجة للتطعيم الحيوي لمياه الصرف الصحي في معمل تقطير القمح. كانت درجة التلبد الأولية تصل إلى 72.1٪. تم الحفاظ على السلالة في مركز الصين لجمع الثقافة النموذجية ، وكان الرقم CCTCCM 2018098. تم تسجيل جين 16S rDNA في GenBank وكان رقم تسجيل الدخول الخاص به MG987011.
  2. وفقًا لتجربة العامل الفردي ، كانت ظروف التلبد المثلى هي وقت الراحة 30 دقيقة ، و 8 ٪ جرعة متوسطة الثقافة ، و 3 ٪ CaCl2.
  3. كانت ظروف الاستزراع المثلى لبكتيريا M1 هي زمن الثقافة 48 ساعة ودرجة حرارة الثقافة 30 درجة مئوية ودرجة الحموضة الأولية 4.5 وسرعة الدوران 150 دورة في الدقيقة. بعد اختبار التحقق ، وصلت درجة التلبد إلى 82.0٪. أشارت نتائج التحسين المتعامد إلى أن وسط الاستزراع الأمثل لبكتيريا M1 يحتوي على الجلوكوز كمصدر للكربون (15 جم / لتر) ، والببتون كمصدر وحيد للنيتروجين (2 جم / لتر) ، ونسبة جرعة فوسفات تبلغ 1 جم / لتر. KH2ص4 إلى 2.5 جم / لتر كلفن2HPO4. تم تحقيق درجة عالية من التلبد باستخدام وسيط منخفض التكلفة.
  4. أظهرت هذه التجارب أنه يمكن استخدام سلالة M1 كسلالة جيدة تنتجها بكتيريا بيولوجية لمياه الصرف الصحي في معمل تقطير القمح. تم تطوير طريقة جديدة لتنقية مياه الصرف الناتجة عن تقطير القمح بالمواد الحيوية.

شكر وتقدير

تم دعم هذه الدراسة بمنحة من Anhui Research and Development Program (1704a07020064).

قائمة المراجع

Agunbiade، M.O.، Van Heerden، E.، Pohl، C.H، and Ashafa، A. T. (2017). "أداء التلبد من boflocculant التي تنتجها Arthrobacter humicola في معالجة مياه الصرف الصحي ، " BMC Biotechnol. 17 ، 51. DOI: 10.1186 / s12896-017-0375-0

الشمراني ، أ.أ ، جيمس ، أ. ، وشياو ، هـ. (2002). "زعزعة استقرار مستحلبات الزيت والماء والفصل عن طريق التعويم بالهواء المذاب ،" الدقة المياه. 36 ، 1503-1512. DOI: 10.1016 / S0043-1354 (01) 00347

Chai، X.-L.، Chen، J.، and Wang، M. (2000). "تنقية وتطبيق bioflocculant ،" معالجة المياه الصناعية 20(6), 23-25.

Chen، X.-F.، Huang، C.، Yang، X.-Y.، Xiong، L.، Chen، X.-D.، and Ma، L.-L. (2013). "تقييم تأثير التركيبة المتوسطة وحالة التخمير على إنتاج الزيت الميكروبي بواسطة Trichosporon cutaneum على التحلل المائي لحمض كوز الذرة ، " بيوريسورس تكنول. 143 ، 18-24. DOI: 10.1016 / j.biortech.2013.05.102

GB / T 11901-89 (1989). "تحديد المواد المعلقة بنوعية المياه بطريقة الجاذبية" ، إدارة التقييس بالصين ، بكين ، الصين.

GB / T 11914-89 (1989). "تحديد طلب الأكسجين الكيميائي لجودة المياه بطريقة ثنائية الكرومات" ، إدارة التقييس بالصين ، بكين ، الصين.

GB / T 7488-87 (1987). "تحديد الطلب الكيميائي الحيوي لمدة خمسة أيام على الأكسجين (BOD5) لجودة المياه ،" إدارة التقييس في الصين ، بكين ، الصين.

Guo ، J. Y. (2013). معالجة مياه الصرف الصحي للخنازير باستخدام التكتلات الحيوية والامتزاز بالزيوليت المعدل كيميائياً، دكتوراه. أطروحة ، جامعة هونان ، تشانغشا ، الصين.

Guo، J.، Lau، A. K.، Zhang، Y.، and Zhao، J. (2015). "آلية التوصيف والتلبد لمركب حيوي من مياه الصرف الصحي لنشا البطاطس ،" تطبيق ميكروبيول. بيوت. 99 (14) ، 5855-5861. DOI: 10.1007 / s00253-015-6589-y

هو ، واي سي ، نورلي ، آي ، الكرخي ، أ.ف ، ومراد ، إن (2010). "توصيف مادة الندف البوليمرية الحيوية (البكتين) والمواد الندفية الاصطناعية العضوية (PAM): دراسة مقارنة حول العلاج والتحسين في تعليق الكاولين ،" تقنية Bioresource 101 ، 1166-1174. DOI: 10.1016 / j.biortech.2009.09.064

كوران ، ر. ، تويدا ، ك. ، تاكيدا ، ك. ، وسوزوكي ، ت. (1986). "ظروف الثقافة لإنتاج الندف الميكروبي من قبل Rhodococcus erythropolis,” زراعي. بيول. تشيم. طوكيو 50 (9) ، 2309-2313. DOI: 10.1080 / 00021369.1986.10867747

لي ، جي ، يون ، Y.-q. ، Xing ، L. ، and Song ، L. (2017). "bioflocculant المستحدثة التي تنتجها سلالة القلوية المتحملة للملح Oceanobacillus polygoni HG6 وتطبيقاته في معالجة مياه الصرف الصحي للمدابغ ، " بيوسكي. التكنولوجيا الحيوية. بيوش. 81 (5) ، 1018-1025. DOI: 10.1080 / 09168451.2016.1274635

Li ، X. ، Li ، X.M ، and Yang ، L. (2007). "فحص سلالة منتجة للنبتة وخصائصها التلبدية ،" التكنولوجيا الحيوية 33(1), 33-37.

Li ، W. ، Zhou ، W. ، Zhang ، Y. ، Wang ، J. ، and Zhu ، V. (2008). "سلوك التلبد وآلية عديد السكاريد الخارجي من بكتيريا محبة للنفسية في أعماق البحار الزائفة الزائفةص. SM9913 ، " تقنية Bioresource 99 (15) ، 6893-6899. دوى: 10.1080 / 02772240802590277

Liu، Z.-y.، Hu، Z.-q.، Wang، T.، Chen، Y.-y.، Zhang، J.، Yu، J.-r.، Zhang، T.، Zhang، Y .-f. ، و Li ، Y.-l. (2013). "إنتاج مواد الندف الميكروبية الجديدة من قبل كليبسيلا ص. TG-1 باستخدام مخلفات النفايات من صناعة الأغذية واستخدامها في التغوط في نظام التعليق trona ، " بيوريسورس تكنول. 139 ، 265-271. DOI: 10.1016 / j.biortech.2013.03.165

Lu، W. Y.، Zhang، T.، Zhang، D. Y.، Li، C.H، Wen، J.P، and Du، L. X. (2005). “منتج حيوي جديد من إنتاج الهوائيات المعوية واستخدامه في التغوط بنظام التعليق الهوائي "، بيوتشيم. م. ج. 27 ، 1-7. DOI: 10.1016 / j.bej.2005.04.026

، تشين ، إل ، تشين ، سي ، تشانغ ، دبليو ، ليو ، إم ، هان ، واي ، وتشو ، جي (2014). "إنتاج وخصائص التكاثر الحيوي من قبل الكلبسيلة الرئوية YZ-6 معزول عن لعاب الإنسان " تطبيق بيوتشيم. التكنولوجيا الحيوية. 172 (3) ، 1282-1292. DOI: 10.1007 / s12010-013-0601-8

مورثي ، إتش إن ، وبرافين ، إن. (2013). "مصادر الكربون ودرجة الحموضة المتوسطة تؤثر على نمو ويثانيا سومنيفيرا (لام) الجذور العرضية وإنتاج withanolide A ، " بحوث منتجات الطبيعة 27 (2) ، 185-189. DOI: 10.1080 / 14786419.2012.660691

Okaiyeto، K.، Nwodo، U. U.، Mabinya، L.V، and Okoh، A.I (2015). "عصية تويونينسيس سلالة AEMREG6 ، وهي بكتيريا معزولة من عينات رواسب البيئة البحرية في جنوب إفريقيا تنتج بروتين سكري حيوي "، جزيئات 20 (3) ، 5239-5259. DOI: 10.3390 / جزيئات20035239

بانج ، سي ، لي ، إيه ، كوي ، دي ، يانغ ، جي ، ما ، إف ، وجو ، هـ. (2016). "تسلسل الجينوم الكامل الكلبسيلة الرئوية J1 ، وهي بكتيريا بروتينية منتجة لمواد الندف ، " J. Biotechnol. 220, 90-91. DOI: 10.1016 / j.jbiotec.2016.01.020

رودين ، سي (2004). "مادة الأكريلاميد ومخاطر السرطان - تقييمات الخبراء للمخاطر والنقاش العام ،" الغذاء تشيم. توكسيكول. 42 (3) ، 335-349. DOI: 10.1016 / j.fct.2003.10.017

سيكيلوا ، سي ، أنتوني ، يو إم ، فوياني ، إم إل ، وأنتوني ، أو آي (2013). & # 8220 توصيف عامل حيوي متعدد السكاريد قابل للحرارة ينتج بواسطة فيرجيبسيلوس الأنواع المعزولة من خليج ألجوا ، " Afr. J. ميكروبيول. الدقة. 7 (23) ، 2925-2938. دوى: 10.5897 / AJMR12.2371

Vijayalakshmi، S. P.، and Raichur، A.M (2003). “فائدة Bacillus subtilisas ملوث حيوي للفحم الناعم ، " الأمواج الغروية ، ب 29 ، 265-270. DOI: 10.1016 / S0927-7765 (03) 00005-5.

وانج ، إس جي ، جونج ، دبليو- إكس ، ليو ، إكس دبليو ، تيان ، إل ، يو ، كيو واي ، وغاو ، بي واي (2007). "إنتاج مستنقع حيوي جديد عن طريق ثقافة كليبسيلا موبيليس باستخدام مياه الصرف الصحي لمنتجات الألبان ، " بيوتشيم. م. ج. 36 (2) ، 81-86. DOI: 10.1016 / j.bej.2007.02.003

Xing، J.، Yang، J.، Ma، F.، Wang، W.، and Liu، K. (2010). "خصائص النمو وحركية التخمير للبكتيريا F2 المنتجة للمواد الندفية ،" محاضر. N. Bioinformat. 6330 ، 691-699. DOI: 10.1007 / 978-3-642-15615-1_81

يان ، دي ف (2013). تحسين الحالة وتحليل آلية التلبد للبكتيريا الحيوية التي تنتجها الكائنات الحية الدقيقة باستخدام مياه الصرف الصحي من نشا البطاطس، رسالة ماجستير، جامعة قانسو للزراعة، لانتشو، الصين.

يانج إم ، ليانج ، واي ، دو ، واي ، جيا ، إكس ، وتشي ، هـ. (2015). "عزل وتحديد السلالة المنتجة للتلوث الحيوي وتحسين الظروف الثقافية عبر نموذج سطح الاستجابة " تشيم. ايكول. 31 (7) ، 650-660. DOI: 10.1080 / 02757540.2015.1075516

Yang، Z.-H.، Huang، J.، Zeng، G.-M.، Ruan، M.، Zhou، C.-S.، Li، L.، and Rong، Z.-G. (2009). "تحسين ظروف التلبد لتعليق الكاولين باستخدام مادة الندف المركبة لـ MBFGA1 و PAC عن طريق منهجية سطح الاستجابة ،" بيوريسورس تكنول. 100 (18) ، 4233-4239. DOI: 10.1016 / j.biortech.2008.12.033

تشاو ، سي ، يانغ ، كيو ، وتشانغ ، هـ. (2017). "تحسين الوسط الميكروبي لإنتاج المواد الندفية لـ العصوية الرقيقة,” الهندي J. Microbiol. 57 (1) ، 83-91. DOI: 10.1007 / s12088-016-0631-3

Zhao، H.، Liu، H.، and Zhou، J. (2013a). "توصيف عامل التطعيم الحيوي MBF-5 بواسطة الكلبسيلة الرئوية وتطبيقاته في إزالة أكياس الشوكميبا ، " بيوريسور. تكنول. 137 ، 226-232. DOI: 10.2166 / washdev.2014.181

تشاو ، ج ، وليو ، سي (2008). "فحص وحالة الاستزراع الأمثل للبكتيريا المنتجة لمواد الندف الميكروبية ،" في: 2 و المؤتمر الدولي للمعلوماتية الحيوية والهندسة الطبية الحيوية، شنغهاي ، الصين ، الصفحات من 4409 إلى 4412.

تشاو ، إل ، فان ، إف ، وانج ، بي ، وجيانغ ، إكس (2013 ب). "تحسين وسط الثقافة لعديد السكاريد البكتيري الجديد خارج الخلية مع نشاط ممتاز للاحتفاظ بالرطوبة ،" تطبيق بيوتشيم. التكنولوجيا الحيوية. 97 (7) ، 2841-2850. DOI: 10.1007 / s00253-012-4515-0

زانج ، ج ، ليو ، زد ، وانج ، س ، وجيانغ ، ب. (2002). "توصيف أحد العوامل الحيوية التي تنتجها البكتيريا المخاطية البحرية نانوسيستيس ص. NU-2 ، " علم الأحياء الدقيقة التطبيقي والتكنولوجيا الحيوية 59 (4/5) ، 517-522. DOI: 10.1643 / CE-08-012

Zheng ، Y. ، Ye ، Z.L ، Fang ، X.L ، Li ، Y.H ، and Cai ، W.M (2008). "إنتاج وخصائص عامل حيوي ينتج بواسطة عصية ص. F19 ، " تقنية Bioresource 99 ، 7686-7691. DOI: 10.1016 / j.biortech.2008.01.068

تم إرسال المقال: ٧ مايو ٢٠١٨ اكتمال مراجعة النظراء: ١٧ يوليو ٢٠١٨ تم استلام النسخة المنقحة: ١٥ أغسطس ٢٠١٨ تم القبول: ١٦ أغسطس ٢٠١٨ تاريخ النشر: ٢٧ أغسطس ٢٠١٨.


شذوذ في نمو الفطر في مرق البطاطس دكستروز ... العكارة لا تظهر في قارورة واحدة - علم الأحياء

إجراءات المختبر للكائنات الحية الدقيقة

إعداد وتخزين وسائل الإعلام الثقافية

الاحتياطات - وسائط مجففة
ضوء
رطوبة
درجة الحرارة والوقت

تحضير الوسائط المجففة
إعادة تكوين الوسائط المجففة
تعقيم وسائط الثقافة
فحوصات التعقيم
آثار الانهاك
جدول الأعطال والأسباب المحتملة لتعقيم الوسائط

تحضير الوسائط المعقمة

تخزين الوسائط المعدة

احتياطات عند استخدام الوسائط المحضرة والتخلص منها

الاحتياطات - وسائط مجففة

اختبارات مراقبة الجودة من قبل المستخدم والمختبر على الوسائط المعدة

يجب تخزين وسائط الثقافة في درجة الحرارة المحددة ، في ظل ظروف محددة وليس أطول من فترات الصلاحية المناسبة لكل منتج. تظهر شروط التخزين وتاريخ انتهاء الصلاحية لكل منتج على الملصقات أو إدخالات المنتج ولكن القواعد العامة التالية ستساعد في ضمان الاحتفاظ بها في بيئة مثالية. عند تخزين المنتجات ، لاحظ تواريخ انتهاء الصلاحية على الملصقات واستخدم المنتجات بترتيب أرقام الدُفعة / الدُفعة.

يجب تخزين جميع وسائط الاستزراع المحضرة ومكوناتها بعيدًا عن الضوء ويجب تجنب التعرض لأشعة الشمس المباشرة في جميع الأوقات.

لا تتأثر العبوات الزجاجية والبلاستيكية المغلقة بالرطوبة الطبيعية في المختبر. تتأثر حاويات المساحيق المجففة المفتوحة بالرطوبة العالية. لا تعد غرف إعداد الوسائط الساخنة والمليئة بالبخار بيئات مناسبة لتخزين حاويات وسائط الاستزراع خاصة الحاويات التي يتم فتحها وإغلاقها بشكل متكرر. يفضل استخدام غرفة باردة مجاورة أو خزانة تخزين مناسبة.

تختلف ظروف تخزين درجة حرارة وسط الاستزراع ومكوناته بشكل كبير. ستساعد مجموعات المنتجات التالية على التمييز بين المتطلبات المختلفة.

وسائط الثقافة: يجب تخزين الحاويات المختومة وغير المفتوحة في درجة حرارة الغرفة 15-20 درجة مئوية. يجب أن يكون الغطاء أو الغطاء مستبدلاً بحذر وبشكل آمن في الحاويات المفتوحة. من المهم أن يتم تخزين الحاويات المفتوحة في جو جاف في درجة حرارة الغرفة. مدة الصلاحية من 1 إلى 5 سنوات.

وسائط المرق المعدة: يخزن في 2-8 درجة مئوية. لا تسمح للمنتجات بالتجميد. مدة الصلاحية من 6 أشهر إلى سنتين.

اللوحات المحضرة لوسائط الاستنبات: تكون الصفائح المصبوبة من وسط الأجار معرضة بشكل خاص للعدوى والجفاف والتدهور الكيميائي. يعد تحضير وتخزين المواد المعقمة أمرًا ضروريًا لحماية الأطباق من العدوى الميكروبية. يمكن التقليل من فاقد المياه عند التخزين عن طريق التغليف المحكم و / أو التخزين عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية. التحلل الكيميائي على سبيل المثال الأكسدة أو فقدان مضادات الميكروبات ، يمكن إعاقته بالحماية من الضوء والحرارة والجفاف.

ومع ذلك ، من المهم مراقبة تخزين الألواح المحضرة عن طريق اختبارات مراقبة الجودة بحيث يمكن اكتشاف أي تدهور وتحديد فترة التخزين بدقة. ستحدد اختبارات الوزن البسيطة للألواح الطازجة والمخزنة معدل فقد الرطوبة. سيشير فقدان الوزن بنسبة تزيد عن 5٪ إلى خسارة كبيرة في الماء.

مجموعات توليد الغاز: تخزن في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية في مكان جاف. لا تقم بتخزين هذه المجموعات في درجة حرارة أعلى لفترات طويلة. مدة الصلاحية 3 سنوات.

الكواشف المعقمة: يُحفظ في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية ، باستثناء متجر مصل الحصان في درجة حرارة -20 إلى +8 درجة مئوية.

أقراص الحساسية: يجب تخزينها في درجة حرارة -20 درجة مئوية مع الاحتفاظ بالمخزون العامل عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية. مدة الصلاحية من 1 إلى 2 سنة.

تحضير الوسائط المجففة

الوسائط المجففة هي مواد استرطابية وحساسة للرطوبة والحرارة والضوء. تتأثر سلبًا بالتغيرات الجذرية في درجة الحرارة على سبيل المثال. درجات حرارة الدراجات الساخنة / الباردة التي قد تحدث بين درجات حرارة المختبر ليلا ونهارا في الشتاء.

عادة ما يشار إلى شروط التخزين على ملصق المنتج ويجب اتباعها.

1 & # 9 اكتب على الملصق تاريخ الاستلام في المختبر.

2 & # 9 تخزين كما هو موضح على الملصق عادة أقل من 25 درجة مئوية في منطقة جافة ، بعيدًا عن أشعة الشمس المباشرة ، أو الأوتوكلاف ، أو أفران التجفيف أو مصادر الحرارة الأخرى.

3 & # 9 تحقق من تاريخ انتهاء الصلاحية الموجود على الملصق ، فبعض الوسائط لها عمر افتراضي أقصر بكثير من غيرها.

4 & # 9 استخدم المخزون في أمر رقم الدُفعة / الدُفعة. لا تفتح زجاجة جديدة حتى يتم إفراغ الزجاجة السابقة. لاحظ على الملصق تاريخ فتح الحاوية لأول مرة. بعد الاستخدام ، تأكد من إغلاق الحاوية بإحكام وأعدها إلى منطقة التخزين المخصصة.

5 & ​​# 9 اطلب الوسيط بحجم مناسب للحاوية وبكمية تتوافق مع متطلبات الاستخدام العادي. وسيتدهور الوسيط الموجود في حاوية كبيرة تم فتحها عدة مرات عند التخزين. تجاهل الوسط إذا لم يكن المسحوق يتدفق بحرية ، أو إذا تغير اللون أو بدا غير طبيعي بأي شكل من الأشكال.

إعادة تكوين الوسائط المجففة

يتم إعطاء تعليمات كاملة لإعداد وسائط الثقافة على ملصق كل زجاجة. كقاعدة عامة ، من الحكمة تحضير شرط أسبوع واحد فقط.

1 & # 9 استخدم دائمًا الماء المقطر أو منزوع الأيونات الطازج. استخدم الماء الدافئ (50 درجة مئوية) لتسريع حل الوسط. اشطف جميع الأواني الزجاجية بالماء المقطر / منزوع الأيونات وتأكد من أن الأوعية نظيفة وخالية من المواد الكيميائية السامة التي قد يتم امتصاصها على سطح الزجاج ، على سبيل المثال. أملاح الصفراء ، التيلوريت ، السيلينيت ، إلخ.

2 & # 9 تحضير الوسط في وعاء بحوالي ضعف الحجم النهائي للوسيط للسماح بالخلط الكافي. اتبع التعليمات الموجودة على ملصق كل منتج.

3 & # 9 افتح حاوية وسط الثقافة بعيدًا عن المسودات والرطوبة. تجنب استنشاق المسحوق وملامسة الجلد لفترات طويلة. قم بوزن المسحوق بسرعة وبدقة وبدون تكوين "سحب من الغبار". أعد إغلاق الحاوية في أسرع وقت ممكن. صب نصف الحجم المطلوب من الماء المقطر في الوعاء ، ثم الكمية الموزونة من الوسط وحركه بخفة لبضع دقائق. صب بقية الماء المقطر على جوانب الوعاء لغسل أي وسيط ملتصق مرة أخرى في المحلول. هذه خطوة مهمة لأن مسحوق وسائط الثقافة الجافة فوق مستوى الماء قد لا يتم تعقيمه في الأوتوكلاف وقد يكون مصدرًا للتلوث.

عادة ما تذوب الوسائط الخالية من الآغار عند التحريض اللطيف. يجب تسخين الوسائط التي تحتوي على أجار لإذابة الأجار قبل التعقيم. اجلب الوسط إلى الغليان دون حرق أو حرق. تتطلب معظم وسائط الاستزراع التعقيم النهائي في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.

تم تعديل الرقم الهيدروجيني للوسط المجفف من قبل الشركة المصنعة بحيث يتوافق الرقم الهيدروجيني النهائي للوسط المحضر مع مواصفات الملصق عندما يتم تبريد الوسيط إلى 25 درجة مئوية. لا تقم بضبط الأس الهيدروجيني للوسائط المجففة قبل التعقيم.

تعقيم وسائط الثقافة

على الرغم من أن تعقيم وسط الاستزراع يتم بشكل أفضل في الأوتوكلاف البخاري عند درجات حرارة تتراوح بين 121-134 درجة مئوية ، يجب إدراك أن الضرر يحدث للوسط بسبب عملية التسخين.

تؤدي المعالجة الحرارية لوسائط الاستنبات المعقدة التي تحتوي على الببتيدات والسكريات والمعادن والمعادن إلى تدمير المغذيات ، إما عن طريق التحلل الحراري المباشر أو عن طريق التفاعل بين مكونات الوسط.

يمكن أيضًا تكوين المنتجات السامة الناتجة عن الأكسدة الكيميائية أثناء المعالجة الحرارية. لذلك ، من المهم تحسين عملية التسخين بحيث يكون الوسيط معقمًا بعد التسخين ولكن يحدث ضرر ضئيل لمكونات الوسيط. كقاعدة عامة ، من المقبول أن العمليات قصيرة المدى ودرجات الحرارة المرتفعة تكون أكثر فتكًا بالكائنات الحية وأقل ضررًا كيميائيًا من العمليات الأطول ذات درجات الحرارة المنخفضة ، على سبيل المثال. 3 دقائق عند 134 درجة مئوية ويفضل أن تكون 20 دقيقة عند 115 درجة مئوية.

تعليمات عامة لتعقيم وسائط المزرعة بأحجام تصل إلى لتر واحد عند درجة حرارة 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة على كل ملصق. تختلف الأوتوكلاف من حيث الأداء ، ومع ذلك ، يجب إجراء اختبارات الازدواج الحراري باستخدام أحجام مختلفة من الوسائط لتحديد أوقات "التسخين والتبريد". سيكون من الضروري القيام بذلك عندما يتم تحضير أحجام وسائط أكبر من لترين. من أجل تجنب ارتفاع درجة حرارة وحدات كبيرة الحجم من الوسائط ، يتم عادةً دمج فترتي "التسخين" و "التبريد" في زمن الانتظار 121 درجة مئوية.

يمكن تقسيم دورة التعقيم إلى أربع مراحل:

المرحلة 1 20 درجة -121 درجة مئوية وقت تسخين الغرفة

يعتمد وقت تسخين الغرفة على كفاءة الأوتوكلاف (تفريغ الهواء / إدخال البخار) وحجم الحمولة في الغرفة. يتم قياس الوقت اللازم لهذه المرحلة بواسطة مسبار تسجيل موجود في صمام تفريغ الهواء الموجود في قاعدة الحجرة.

المرحلة 2 & lt100 درجة -121 درجة مئوية زمن نفاذ الحرارة للحاوية المتوسطة

يعتمد وقت اختراق الحرارة بشكل أساسي على حجم الحاويات الفردية ، على الرغم من أن الشكل وخصائص نقل الحرارة للحاويات قد تؤثر على هذه المرحلة. يُقاس الوقت اللازم لوصول الحجم المتوسط ​​إلى 121 درجة مئوية بمزدوجات حرارية موضوعة في وسط الحاوية الداخلية.

الحجم (مل) في الزجاجات & # 9 الوقت (دقيقة)

تفترض هذه الأوقات أن وسائط الأجار قد تم حلها قبل التعقيم. من المفترض أيضًا أن التعرض الأقصى للبخار ممكن. وبالتالي ، على الرغم من أن الزجاجة الواحدة سعة 100 مل تتطلب 12 دقيقة لتصل إلى 121 درجة مئوية ، عند وضعها في صندوق مع زجاجات أخرى ، فإنها تتطلب 19 دقيقة وعند وضعها في وسط الصناديق المكدسة ، فإنها تتطلب 30 دقيقة.

المرحلة 3 121 درجة -121 درجة مئوية فترة التثبيت عند درجة الحرارة المحددة

يعتمد وقت الاحتفاظ عند 121 درجة مئوية على (1) عدد الكائنات الحية الموجودة أصلاً في الوسط (2) العدد الكسري للكائن الحي المفترض وجوده بعد التسخين على سبيل المثال N = 0.001 ما يعادل زجاجة واحدة في كل 1000 زجاجة مسخنة تصبح ملوثة (3) ثابت معدل الموت الحراري للكائن الحي المفترض الموجود عند 121 درجة مئوية.

أوقات الحجز الموصى بها هي:

درجة الحرارة (C) & # 9121 & # 9126 & # 9134

المرحلة 4121-80 درجة مئوية وقت تبريد الغرفة لتصل إلى 80 درجة مئوية

يعتمد وقت التبريد على حجم الحمولة في الحجرة ومعدل فقد الحرارة من الأوتوكلاف. تُستخدم بخاخات الماء لتسريع التبريد في أجهزة التعقيم التجارية ولكن يلزم التحكم الدقيق للغاية لتجنب كسر الزجاجة ودخول رذاذ التبريد إلى الوسط المعقم. تحدث المشكلة الأخيرة عندما يمتص الفراغ المتكون في فراغ الرأس أثناء التبريد سائل التبريد الملوث حتى خيط الغطاء وإلى الزجاجة.

يجب أن تكون الأوتوكلاف لوسائل الإعلام الثقافية بدون علامات وأن تكون ذات سعة الغرفة المعتدلة فقط. يجب أن تمنع الأقفال الحرارية للأبواب من الفتح عندما تكون درجة حرارة الغرفة أعلى من 8 درجة مئوية ولكن حتى في هذه الظروف ، يجب توخي الحذر لتجنب الصدمة الحرارية المفاجئة عند إزالة الزجاجات من السائل الساخن من الأوتوكلاف. عندما يتم وضع الحاويات المغطاة بالبراغي في الأوتوكلاف ، يجب أن تكون الأغطية نصف دورة مجانية للسماح للهواء الساخن بالهروب. عند إزالتها من الأوتوكلاف ، يجب السماح للحاويات بالتبريد في خزانة تدفق الهواء الرقائقي. بدلاً من ذلك ، يمكن تعقيم الحاويات ذات الغطاء اللولبي في جرة مغطاة بقطعة من اللباد تحمي بشكل فعال الحاويات من العدوى بواسطة الكائنات الحية الدقيقة المحمولة بالهواء. يتم شد الأغطية بإحكام بعد أن تبرد المحتويات إلى درجة الحرارة المحيطة.

يجب فحص جميع الأوتوكلاف في فترات زمنية محددة للتأكد من أنها تعمل بكفاءة. يجب إجراء قياسات فيزيائية على قراءات درجة الحرارة والضغط ، ويجب فحص جودة البخار ، ويجب تحديد كفاءة مصائد الهواء "القريبة من البخار" في قاعدة الأوتوكلاف وفحص صمامات الأمان. عادة ما يتم إجراء عمليات التفتيش الإلزامية للأوتوكلاف كأوعية ضغط سنويًا بواسطة متخصصين بموجب تعليمات من شركات التأمين على هذا الجهاز. مع الأوتوكلاف المختبرية الصغيرة ، فإن هذا الفحص ليس إلزاميًا.

ستظهر المؤشرات الكيميائية درجة الحرارة التي تم الوصول إليها أو تجاوزها وسيشير البعض إلى الوقت المحتجز عند درجة الحرارة المحددة. عادة ما يكون التعقيم تحت التعقيم بديهيًا لأن الفشل في تدمير جميع الأبواغ البكتيرية الموجودة بشكل طبيعي في الوسائط المجففة ("الحِمل الحيوي") سيسمح بالنمو في الوسط المخزن أو المحتضن. يجب دائمًا الاشتباه في فشل التعقيم عند حدوث تلوث للوسائط المحضرة بكائنات البوغ. ستظهر المؤشرات البيولوجية للتعقيم قدرة الأوتوكلاف على تدمير الجراثيم البكتيرية.

يعد ارتفاع درجة الحرارة سببًا شائعًا لانجراف الأس الهيدروجيني ، والظلام ، والتساقط ، وضعف قوة الهلام ، وانخفاض الأداء البكتيري. يمكن أيضًا إنتاج هذه التأثيرات إذا تم تسخين "مجموعة" مركزة من المكونات في قاع الحاوية. يجب أن تكون جميع وسائط الاستنبات في محلول قبل التعقيم. سيؤدي ذلك إلى تقليل حدوث تفاعلات من نوع Maillard (الاسمرار غير الأنزيمي) التي تحدث في الوسط.

ستحدث تأثيرات السخونة الزائدة إذا تم السماح لوسائط أجار بالهلام في زجاجات ثم تم تبخيرها لاحقًا لإذابة الأجار. تحدث أيضًا إذا تم الاحتفاظ بالوسائط المنصهرة عند 50 درجة مئوية لأكثر من 3 ساعات قبل الاستخدام. تعد وسائط Agar ذات قيم الأس الهيدروجيني عند 5.0 أو أقل حساسة للغاية لارتفاع درجة الحرارة بأي شكل لأن الأجار يتحلل بالماء وتفشل قوة الهلام. يوصى بتعقيم أجار الوسائط ذات الرقم الهيدروجيني أقل من 5.0 بشكل منفصل.

تحدث معظم الصعوبات في تعقيم وسائط الاستنبات عندما يجب معالجة أحجام كبيرة من الوسائط (& gt2 لتر). أفضل حل لهذه المشكلة هو استخدام محضر وسط الثقافة. تتغلب هذه المعالجات شبه الأوتوماتيكية ، التي تصنعها New Brunswick ومصنعون آخرون ، على مشكلة اختراق الحرارة الضعيف للأجار عن طريق التحريك المستمر أو التحريك للوسط أثناء مرحلة التسخين. ستعمل هذه المحضرات على تقليل الوقت المطلوب للتعقيم بدرجة كبيرة عند 121 درجة مئوية أو في بعض الموديلات عند 134 درجة مئوية. يوصى بها بشدة بسبب كفاءتها العالية وتقليل الضرر الذي يلحق بوسائط الثقافة.

جدول الأعطال والأسباب المحتملة لتعقيم الوسائط

تم إجراء اختبار الأس الهيدروجيني فوق 25 درجة مئوية. التسخين الزائد من خلال التعقيم المطول أو إعادة الصهر أو لفترات طويلة عند 50 درجة مئوية. حل غير مكتمل للوسط. مياه أو حاويات ذات نوعية رديئة. يتم تخزين الوسط المجفف بشكل غير صحيح أو بعد فترة الصلاحية المحددة.

مياه أو حاويات ذات نوعية رديئة. السخونة الزائدة أو التخزين المطول عند 50 درجة مئوية. قيمة الرقم الهيدروجيني غير صحيحة. حل غير كامل.

ارتفاع درجة الحرارة أو حل غير مكتمل أو انجراف الأس الهيدروجيني. وجود الفوسفات بالإضافة إلى الجلوكوز أو السكريات الأخرى والأجار.

أجار ليس في محلول ، خلط سيء ، تخزين مطول عند 50 درجة مئوية. ارتفاع درجة الحرارة عند قيم الأس الهيدروجيني المنخفضة. خطأ في الوزن أو الإفراط في التخفيف مع اللقاح أو مكملات الوسائط. درجة الحموضة منخفضة للغاية بالنسبة للأجار.

تسخين مطول ومفرط ، حل غير كامل. المواد المثبطة في الماء أو الحاويات. سواد وانجراف درجة الحموضة.

تحضير الوسائط المعقمة

يجب تبريد الوسائط السائلة التي يتم تعقيمها في حاوياتها النهائية إلى درجة حرارة الغرفة بأسرع ما يمكن. يجب بعد ذلك إحكام الأغطية اللولبية.

يجب وضع عبوات وسائط الأجار التي تم تعقيمها في حمام مائي تبلغ درجة حرارته 50 درجة مئوية ويتم صرف الوسيط بمجرد وصوله إلى درجة الحرارة هذه ، أو في غضون 3 ساعات كحد أقصى في الحمام. يجب خلط الوسط جيدًا ، دون تكوين فقاعات ، وتوزيعه بشكل معقم في حاويات معقمة. لا تعرض أطباق وسط الأجار لأشعة الشمس لأنها تسبب تكاثفًا مفرطًا على الأغطية وقد تتسبب في تكوين مواد مثبطة عن طريق الأكسدة الضوئية.

يجب إضافة المكملات الغذائية القابلة للحرارة إلى الوسط بعد أن يبرد إلى 50 درجة مئوية. اترك المكمل المعقم يصل إلى درجة حرارة الغرفة قبل إضافته إلى وسط أجار. قد تتسبب السوائل شديدة البرودة في تكوين هلام أجار أو تكوين رقائق شفافة يمكن رؤيتها بسهولة على سبيل المثال. في أجار الدم المخصب. امزج جميع المكملات في الوسط برفق وبشكل كامل ، ثم وزعها في الحاويات النهائية في أسرع وقت ممكن.

يجب أن يكون الدم المستخدم في تحضير أجار الدم طازجًا قدر الإمكان ويجب تخزينه في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية (يجب عدم تجميد الدم). قم بتدفئة الدم في حاضنة 35 درجة مئوية قبل إضافة قاعدة الآجار المعقمة المنصهرة ، والتي تم تبريدها إلى 40-45 درجة مئوية. الخلط الكافي في وعاء كبير للرأس ضروري لضمان تهوية الدم. صفائح الدم المؤكسدة ضعيفة اللون أرجوانية بينما يكون أجار الدم المهوى بشكل صحيح أحمر الكرز. ينصح باستخدام الدم منزوع الفايبر بدلاً من الدم الذي يحتوي على مضادات التخثر.

تخزين الوسائط المعدة

يختلف العمر التخزيني الموصى به لوسائط الاستزراع المحضرة اختلافًا كبيرًا. يمكن تخزين الزجاجات المغطاة ببراغي من مرق المغذيات والأجار لمدة 6 أشهر في درجات حرارة محيطة منخفضة (12 لتر 6 درجة مئوية). من المهم تخزين جميع الوسائط بعيدًا عن الضوء. يجب تخزين ألواح الأجار في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية في حاويات محكمة الغلق لتجنب فقدان الرطوبة. لا تجمد.

تعد الوسائط الحديثة أفضل من الوسائط المخزنة وبالتالي تجنب أوقات التخزين الطويلة. بعض العوامل الانتقائية لبيتا لاكتام شديدة الشدة لها حياة نشطة قصيرة جدًا ويجب استخدام الوسائط التي تحتوي على هذه المواد في غضون أيام قليلة من التحضير.

من الممارسات المعملية الجيدة تحديد فترات الصلاحية لجميع الوسائط المعدة وختم التاريخ على الحاويات أو الحوامل وفقًا لذلك.

يعد فقدان الرطوبة من ألواح الآجار سببًا شائعًا لضعف الأداء البكتيريولوجي. لا تقم باحتضان جميع الأطباق مسبقًا طوال الليل كفحص للعقم. فقط الألواح المبللة بشكل واضح تتطلب تجفيفًا مسبقًا للتلقيح.

تأكد من تحضين جميع الأطباق في بيئة رطبة.

افحص الوسائط المحضرة قبل التلقيح. ابحث عن دليل على وجود تلوث أو حشو غير متساوٍ أو فقاعات على سطح الآجار وتغيرات اللون وانحلال الدم وعلامات الجفاف مثل الانكماش والتشقق وفقدان الحجم. تجاهل أي لوحات أو أنابيب معيبة.

احتياطات عند استخدام الوسائط المحضرة والتخلص منها

يجب أن ندرك أن تلقيح الأوساط المزروعة بالبكتيريا ، عمدا أو عرضا ، يؤدي إلى إنتاج أعداد كبيرة جدا من الكائنات الحية. قد تكون التركيزات العالية لأي كائنات خطرة ويجب التخلص منها بأمان بالطرق المعتمدة.

يجب التعامل مع جميع العينات المصابة ووسائط الاستنبات الملقح فقط من قبل موظفين مؤهلين تم تدريبهم على الإجراءات الميكروبيولوجية. يجب أن يضمن هؤلاء الموظفون أن جميع العينات والثقافات التي تقع تحت رعايتهم يتم التعامل معها بشكل صحيح وتعقيمها في النهاية قبل التخلص منها. يجب تطهير أو تعقيم أي جهاز مستخدم وملوث بأمان ، وهذا مهم بشكل خاص عندما يجب صيانة هذا الجهاز أو تمريره خارج المختبر.

يجب أيضًا مراعاة البيئة التي يتم فيها التعامل مع الثقافات الميكروبيولوجية. معظم البلدان لديها فئات من الكائنات الحية التي تنقسم إلى تلك التي يمكن التعامل معها في المختبر الميكروبيولوجي العام ، وتلك التي تتطلب ظروفًا معملية خاصة وبالنسبة للكائنات الأكثر خطورة ، يلزم وجود بيئة محمية بالكامل ومحمية للغاية. قد يكون عدم مراعاة هذه القواعد واللوائح جريمة جنائية. عند استخدام وسائط الثقافة ، قم دائمًا بتسمية الحاوية أو تحديدها بتفاصيل العينة قبل التلقيح.

تلقيح الوسيلة باستخدام تقنيات التعقيم واحتضانها في ظل الظروف المناسبة.

افحص الوسط بعد الحضانة بحثًا عن دليل على نمو جرثومي وقم بتنفيذ إجراءات العزل والتعريف المناسبة.

الاحتياطات - وسائط مجففة

معظم المنتجات الموردة ليس لها مخاطر معروفة باستثناء تلك المرتبطة عادة بالمساحيق الدقيقة. ومع ذلك ، لمنع خطر استنشاق الغبار الناعم ، يوصى بارتداء الأقنعة أثناء التعامل مع الوسائط المجففة. يجب أن يصل أداء القناع المختار إلى مستوى المعيار البريطاني رقم 6016. سيكون نوع القناع الذي تصنعه شركة 3M مناسبًا لهذا الغرض.

تتوفر أوراق بيانات المخاطر للمنتجات الفردية.

يجب عدم تناول وسائط الاستزراع المجففة التي يتم توفيرها على شكل مساحيق أو حبيبات أو أقراص.لا ينبغي استنشاق المساحيق لأن تهيج الجهاز التنفسي العلوي قد يحدث خاصة مع منتجات ملح الصفراء. لتجنب الطفح الجلدي الخفيف ، امنع التلامس المطول مع المسحوق. يمكن مسح منتجات البودرة ، في حالة انسكابها ، والتخلص منها بالطريقة العادية. يجب غسل أي بقايا بماء بارد وافر.

هناك عدد قليل من المنتجات التي تحتوي على مواد سامة ويجب التعامل معها بحذر.

1 & # 9 وسائط تحتوي على أملاح الثاليوم. تم تصنيف هذه المنتجات على أنها سموم.

تعتبر أملاح الثاليوم شديدة السمية عن طريق الاستنشاق أو الابتلاع وهناك خطر من الآثار التراكمية. يجب حفظ المنتجات التي تحتوي على أملاح الثاليوم بعيدًا عن الطعام والشراب والأعلاف الحيوانية. ارتدِ دائمًا قناعًا وقفازات عند التعامل مع المسحوق.

2 & # 9 وسائط تحتوي على أزيد الصوديوم

تحتوي هذه المنتجات على أقل من 1٪ أزيد الصوديوم ولها سمية منخفضة. ومع ذلك ، فإن بعض الأشخاص لديهم حساسية معززة للأزيد وبالتالي يمكن أن يتفاعلوا مع التعرض العرضي للمنتج. يجب اتخاذ الاحتياطات اللازمة لمنع ابتلاع أو استنشاق الغبار. احرص دائمًا على ارتداء القفازات والقناع وواقي العين.

يتفاعل أزيد الصوديوم مع العديد من المعادن ، وخاصة النحاس ، لإنتاج أزيدات المعادن المتفجرة. عند غسل المنتجات التي تحتوي على أحواض أزيد أسفل ، من الضروري استخدام كمية كافية من الماء لمنع المسحوق من ملامسة الأنابيب والأحواض. يتم تطبيق نفس الاحتياطات على أي محلول بيولوجي يحتوي على أزيد الصوديوم كمادة حافظة.

3 & # 9 الصوديوم بيسلينييت. هذا المنتج مُصنَّف بأنه سام.

إنه مادة أكالة عند ملامستها للجلد وتنتج تأثيرات سامة إذا تم استنشاقها أو بلعها. تم اقتراح تأثيرات مشوهة.

يصل هذا المركب ، المحضر في قوارير تكميلية ، إلى تركيز يعتبر سامًا ويتم تسميته وفقًا لذلك. ومع ذلك ، عند تخفيفه في وسط الاستزراع ، ينخفض ​​تركيزه إلى أقل من المستوى الأدنى الذي يعتبر خطيرًا. من المهم عند إعادة تكوين القوارير التي تحتوي على مستويات سامة من سيكلوهكسيميد التأكد من أن محلول القارورة لا يلمس الجلد ولمنع تكوين الهباء الجوي الذي يسمح باستنشاق المركب. يُنصح باستخدام القفازات الواقية وقناع الوجه عند استخدام هذه القوارير.

اختبارات مراقبة الجودة من قبل المستخدم والمختبر على الوسائط المعدة

يجب إجراء اختبارات مراقبة الجودة بواسطة مختبر المستخدم النهائي للتأكد من أن خصائص أداء الوسيط ضمن المواصفات وأن منهجية التحضير الوسيط مرضية.

يجب أن تخضع كل دفعة / دفعة من الوسيط المُجهز إلى الحد الأدنى من برنامج الاختبار الذي يضمن أنه مقبول وسيُظهر أداء بكتيريًا نموذجيًا.

1 & # 9 قيمة الرقم الهيدروجيني: تحقق من أن الرقم الهيدروجيني للوسط المحضر ، عند اختباره في الشكل النهائي في درجة الحرارة المحيطة (25 درجة مئوية) يقع ضمن النطاق المحدد على ملصق المنتج. يجب التخلص من الوسيط إذا كانت قيمة الأس الهيدروجيني تقع خارج النطاق المحدد.

2 & # 9 العقم: يجب تحضين عينة تمثيلية لكل دفعة / دفعة وسط لمدة 2-5 أيام عند 35-30 درجة مئوية و50-55 درجة مئوية. كقاعدة عامة ، بالنسبة للدفعة التي تتكون من 100 وحدة أو أقل ، يجب اختبار عينة بنسبة 3-5٪. للحصول على دفعة أكبر ، يتم أخذ 10 لوحات أو أنابيب عشوائية. يجب ألا يكون هناك دليل على نمو الميكروبات بعد الحضانة. تجاهل جميع عينات العقم عند الانتهاء من الاختبارات.

أداء النمو 3 & # 9: اختبر خصائص دعم النمو للمنتج عن طريق تلقيح الوسط بمزارع مخزون مناسب و / أو عزلات جديدة. استخدم إجراءً قياسيًا للتلقيح وفحص النتائج الكمية والنوعية التي تم الحصول عليها. إذا كنت تختبر دفعات / دفعات جديدة من الوسائط ، فقم بتلقيح اللوتات القديمة والجديدة في اختبار واحد وقارن أداء المجموعتين جنبًا إلى جنب.

4 & # 9 الاستقرار: قم بتنفيذ الإجراءات المذكورة أعلاه بشكل دوري على الوسائط المخزنة المعدة من أجل تحديد ما إذا كانت ظروف التخزين ستعطي النتائج المثلى.

ملحوظة: إذا كان الوسيط لا يعمل وفقًا للتوقعات وتم اتباع جميع توصيات الشركات المصنعة ، فيجب اتخاذ الخطوات التالية: (1) سجل طبيعة المشكلة وطريقة تحضير الوسيط (2) لاحظ الدفعة / رقم الدفعة وتاريخ استلامها (3) الاتصال بقسم الخدمات الفنية للمورد.

& # 9 (مستنسخ ، مع بعض التغييرات ، من دليل أوكسويد ، الطبعة السادسة ، 1990)

تم إعداد المبادئ التوجيهية لـ CABRI بواسطة DSMZ و CBS و BCCM ، 17 مايو 1998
تخطيط الصفحة بواسطة CERDIC
حقوق النشر CABRI ، 1998

& نسخ اتحاد كابري 1999-2013.
لا يمكن إعادة إنتاج هذا العمل كليًا أو جزئيًا دون الحصول على إذن كتابي صريح من اتحاد كابري CABRI.
يدير الموقع باولو رومانو. آخر مراجعة في أبريل 2013.


مراجع

Karaman I، Sanin Güllüce، Ogutcu H، Sengul M، Adigüzel A: النشاط المضاد للميكروبات لمقتطفات Aquaeos والميثانول من Juniperus oxicedrus. ي إثنوفارماكول. 2003 ، 2837: 1-5.

فابيان أس ، بيتر دي سي ، ماثيو دينار ، ماتيو بي ، دولوريس إم ، ليلي سي ، بول إس دي: أنظمة التربية في الجنس الفطري المكون للحزاز كلادونيا. الجينات الفطرية بيول. 2005 ، 42: 554-563. 10.1016 / j.fgb.2005.03.006.

Huneck S: أهمية الأشنات ومستقلباتها. Naturwissenschaften. 1999 ، 86: 559-570. 10.1007 / s001140050676.

Kirmizigül S، Koz O، Anil H، Icli S: عزل وتوضيح هيكل المنتجات الطبيعية الجديدة من الأشنات التركية. ترك ي كيم. 2003 ، 27: 493-500.

Malhotra S ، Subban R ، Singh A: دور الأشنات في الطب التقليدي واكتشاف الأدوية. الإنترنت J البديل ميد. 2008 ، 5: 2-

Karagoz A، Dogruoz N، Zeybek Z، Aslan A: نشاط مضاد للجراثيم لبعض مستخلصات الأشنة. J Med Plants Res. 2009 ، 3: 1034-1039.

Kosanić M ، Ranković B: نشاط مضاد للجراثيم ومضاد للفطريات لمستخلصات الأشنات المختلفة وحمض الأشنة. الدقة ي التكنولوجيا الحيوية. 2011 ، 6:23 - 26.

Tohma HS، Gulcin I: نشاط مضادات الأكسدة والكسح الجذري للأجزاء الهوائية وجذور عرق السوس التركي (Glycyrrhiza glabra L.). Int J Food Prop. 2010 ، 13: 657-671. 10.1080 / 10942911003773916.

Ibanez E ، Kubatova A ، Senorans FJ ، Cavero S ، Reglero G ، Hawthorne SB: استخراج المياه دون الحرجة لمركبات مضادات الأكسدة من نباتات إكليل الجبل. J أغر فود تشيم. 2003 ، 51: 375-382. 10.1021 / jf025878j.

Dorman HJ ، Bachmayer O ، Kosar M ، Hiltunen R: الخصائص المضادة للأكسدة من المستخلصات المائية من أنواع Lamiaceae المختارة المزروعة في تركيا. J أغر فود تشيم. 2004 ، 52: 762-770. 10.1021 / jf034908v.

Talaz O ، Gulcin I ، Goksu S ، Saracoglu N: النشاط المضاد للأكسدة لـ 5،10-ثنائي هيدروويندينو [1،2-ب] إندولات تحتوي على بدائل في جزء ثنائي هيدروويندينو. بيورج ميد كيم. 2009 ، 17: 6583-6589. 10.1016 / j.bmc.2009.07.077.

Oyaizu M: دراسات على منتجات تفاعل اللون البني المحضر من الجلوكوزامين. Jpn J نوتر. 1986 ، 44: 307-314. 10.5264 / eiyogakuzashi.44.307.

Nishimiki M ، Rao NA ، Yagi K: حدوث أنيون الأكسيد الفائق في تفاعل ميثوسلفات الفينازين المختزل والأكسجين الجزيئي. Biochem Biophys Res Commun. 1972 ، 46: 849-853. 10.1016 / S0006-291X (72) 80218-3.

Slinkard K ، Slingleton VL: التحليلات الفينولية الكلية: الأتمتة والمقارنة بالطريقة اليدوية. أنا J Enol Viticult. 1997 ، 28: 49-55.

Meda A و Lamien CE و Romito M و Millogo J و Nacoulma OG: تحديد إجمالي محتويات الفينول والفلافونويد والبرولين في عسل بوركين فاسان ، بالإضافة إلى نشاطهم في الكسح الجذري. الغذاء تشيم. 2005 ، 91: 571-577. 10.1016 / j.foodchem.2004.10.006.

NCCLS (اللجنة الوطنية لمعايير المختبرات الإكلينيكية): الطريقة المرجعية لاختبار التحسس المضاد للفطريات لتخفيف المرق للفطريات الخيطية المكونة للكونيديوم: المعيار المقترح M38-P. 1998 ، NCCLS ، واين ، بنسلفانيا ، الولايات المتحدة الأمريكية

Sarker SD ، Nahar L ، Kumarasamy Y: فحص مضاد للجراثيم قائم على لوحة ميكروتيتر يشتمل على ريسازورين كمؤشر لنمو الخلايا ، وتطبيقه في في المختبر الفحص المضاد للبكتيريا للمواد الكيميائية النباتية. أساليب. 2007 ، 42: 321-324. 10.1016 / j.ymeth.2007.01.006.

Mosmann T: الفحص اللوني السريع للنمو الخلوي والبقاء على قيد الحياة: التطبيق على فحوصات الانتشار والسمية الخلوية. طرق المناعة J. 1983 ، 65: 55-63. 10.1016 / 0022-1759 (83) 90303-4.

Ohno M، Abe T: الفحص اللوني السريع للتقدير الكمي للعامل المثبط لسرطان الدم (LIF) والإنترلوكين 6 (IL-6). طرق J Immunol. 1991 ، 145: 199-203. 10.1016 / 0022-1759 (91) 90327-C.

شاهيدي ف ، واناسوندارا PKJPD: مضادات الأكسدة الفينولية. Crit Rev Food Sci Nutr. 1992 ، 32: 67-103. 10.1080 / 10408399209527581.

Kaushik R ، Narayanan P ، Vasudevan V ، Muthukumaran G ، Antony U: التركيب الغذائي لأوراق ستيفيا المزروعة وتأثير البوليفينول والأصباغ النباتية على الخصائص الحسية ومضادات الأكسدة لمستخلصات الأوراق. J Food Sci Technol. 2010 ، 47: 27-33. 10.1007 / s13197-010-0011-7.

Sawa T و Nakao M و Akaike T و Ono K و Maeda H: نشاط الكسح الجذري للألكيلبيروكسيل لمختلف مركبات الفلافونويد والمركبات الفينولية الأخرى: الآثار المترتبة على تأثير محفز الورم للخضروات. جي أغريك فود تشيم. 1999 ، 47: 397-492. 10.1021 / jf980765e.

محمد فاج ، ناجندرا بي كي ، كونغ كو ، أمين الأول: فلافونويد ، هيسبيريدين ، إجمالي محتويات الفينول وأنشطة مضادات الأكسدة من أنواع الحمضيات. Afr J Biotechnol. 2010 ، 9: 326-330.

رانكوفيتش ب ، رانكوفيتش د ، كوسانيتش إم ، ماريتش د: خصائص مضادة للأكسدة ومضادة للميكروبات للحزاز Anaptychya ciliaris ، Nephroma parile ، Ochrolechia tartarea و الطرد المركزي بارميليا. Cent Eur J Biol. 2010 ، 5: 649-655. 10.2478 / s11535-010-0043-z.

Odabasoglu F و Aslan A و Cakir A و Suleyman H و Karagoz Y و Halici M و Bayir Y: مقارنة بين نشاط مضادات الأكسدة والمحتوى الفينولي لثلاثة أنواع من الأشنات. Phytother Res. 2004 ، 18: 938-941. 10.1002 / ptr.1488.

Mukherjee S ، Pawar N ، Kulkarni O ، Nagarkar B ، Thopte S ، Bhujbal A ، Pawar P: تقييم خصائص التبريد الجذور الحرة لتركيبة الأيورفيدا القياسية Vayasthapana Rasayana. BMC Complem Altern Med. 2011، 11: 38-10.1186 / 1472-6882-11-38.

Gulcin I، Oktay M، Kufrevioglu OI، Aslan A: تحديد نشاط الحزاز المضاد للأكسدة Cetraria Islandica (L) آتش. ي إثنوفارماكول. 2002 ، 79: 325-329. 10.1016 / S0378-8741 (01) 00396-8.

Behera BC، Verma N، Sonone A، Makhija U: أنشطة الحزاز المضادة للأكسدة والمضادة للبكتيريا Usnea ghattensis في المختبر. التكنولوجيا الحيوية ليت. 2005 ، 27: 991-995. 10.1007 / s10529-005-7847-3.

Kekuda PTR، Vinayaka KS، Praveen Kumar SV، Sudharshan SJ: نشاط مضاد للأكسدة ومضاد للبكتيريا لمستخلصات الأشنة والعسل ومزيجها. J فارم الدقة. 2009 ، 2: 1875-1878.

Manojlović N ، Vasiljević P ، Gritsanapan W ، Supabphol R ، Manojlović I: دراسات الكيمياء النباتية ومضادات الأكسدة Laurera benguelensis ينمو في تايلاند. بيول ريس. 2010 ، 43: 169-176.

أصلان أ ، جولوس إم ، سوكمن إم ، أديجوزيل أ ، شاهين ف ، أوزكان ح: خصائص مضادات الأكسدة ومضادات الميكروبات للأشنات Cladonia foliacea ، Dermatocarpon miniatum ، Evernia divaricata ، Evernia prunastri و نيوفوسيلا بولا. فارم بيول. 2006 ، 44: 247-252. 10.1080 / 13880200600713808.

Adedapo A ، Jimoh F ، Koduru S ، Afolayan JA ، Masika JM: خصائص مضادة للبكتيريا ومضادة للأكسدة من مقتطفات الميثانول من أوراق وسيقان كالبورينا أوريا. BMC Complem Altern Med. 2008 ، 8: 53-60. 10.1186 / 1472-6882-8-53.

يانغ واي ، أندرسون إي جيه: النشاط المضاد للميكروبات لنيلوبيروزيداز الخنازير ضد البكتيريا والفطريات الوراثية النباتية. J أبل ميكروبيول. 1999 ، 86: 211-220. 10.1046 / j.1365-2672.1999.00652.x.

Heijenoort J: تشكيل سلاسل الجليكان في تخليق الببتيدوغليكان البكتيري. بيولوجيا السكر. 2001 ، 11: 25-36.

Ruiz-Herera J: جدار الخلية الفطري: الهيكل والتوليف والتجميع. 1992 ، مطبعة سي آر سي ، بوكا روتون ، الولايات المتحدة الأمريكية

Farkaš V: التركيب والتخليق الحيوي لجدران الخلايا الفطرية: مناهج منهجية. فوليا ميكروبيول. 2003 ، 48: 469-478. 10.1007 / BF02931327.

Candan M، Yilmaz M، Tay T، Erdem M، Turk AO: النشاط المضاد للميكروبات لخروج الأشنة بارميليا سولكاتا ومكونه حمض السالازينيك. Z Naturforsch. 2007 ، 62: 619-621.

Goel M و Dureja P و Rani A و Uniyal PL و Laatsch H: العزلة والتوصيف والنشاط المضاد للفطريات للمكونات الرئيسية لحزاز الهيمالايا Parmelia reticulata Tayl. †. J أغر فود تشيم. 2011 ، 59: 2299-2307. 10.1021 / jf1049613.

Bezivin C ، Tomasi S ، Lohezic-Le Devehat F ، Boustie C: النشاط السام للخلايا لبعض مستخلصات الأشنة على خطوط الخلايا السرطانية البشرية والفأرية. فيتوميد. 2003 ، 10: 499-503. 10.1078 / 094471103322331458.

Manojlović N و Vasiljevi P و Jusković M و Najman S و Janković S و Milenkovic-Andjelković A: تحليل HPLC وإمكانات السمية الخلوية لمقتطفات من الأشنة ، Thamnolia vermicularis var. سوبوليفورميس. J Med Plants Res. 2010 ، 4: 817-823.

Triggiani D ، Ceccarelli D ، Tiezzi A ، Pisani T ، Munzi S ، Gaggi C ، Loppi S: النشاط المضاد للتكاثر لمستخلصات الأشنة على خلايا المايلوما الفأرية. بيولوجيا. 2009 ، 64: 59-62. 10.2478 / s11756-009-0005-y.

Bucar F ، Schneider I ، Ogmundsdottir H ، Ingolfsdottir K: مركبات الأشنة المضادة للتكاثر مع نشاط مثبط على إنتاج 12 (S) -HETE في الصفائح الدموية البشرية. فيتوميد. 2004 ، 11: 602-606. 10.1016 / j.phymed.2004.03.004.

Burlando B و Ranzato E و Volante A و Appendino G و Pollastro F و Verotta L: التأثيرات المضادة للتكاثر على الخلايا السرطانية وتعزيز التئام الجروح الكيراتينية بمركبات الأشنة المختلفة. بلانتا ميد. 2009 ، 75: 607-613. 10.1055 / s-0029-1185329.

تاريخ ما قبل النشر

يمكن الوصول إلى تاريخ ما قبل النشر لهذه الورقة هنا:


  1. عينة الاختبار
  2. أجار عدد الصفائح (PCA) أو الآجار المغذي
  3. حمام ماء ساخن 45 درجة مئوية
  4. أطباق بتري معقمة
  5. لهب
  6. عداد مستعمرة مع عدسة مكبرة
  7. أنابيب اختبار معقمة 16 * 150 مم
  8. ماصات بأحجام مختلفة (على سبيل المثال 01 و 1.0 و 2.0 مل)
  1. قم بإعداد التخفيف لعينة الاختبار المتوقع أن تحتوي على ما بين 30-300 CFU / مل. (اتبع تقنية التخفيف التسلسلي)
  2. تلقيح طبق بتري فارغ مع مل محدد (0.1 أو 1.0 مل) من العينة المخففة

ملاحظة: للحصول على وصف مفصل فيما يتعلق باستخدام الماصة ، وتلقيح العينة ، وتقنية التخفيف وما إلى ذلك ، اتبع المرجع 1.

صب الأجار المنصهر والحضانة

  1. جمع زجاجة واحدة من الأجار المنصهر المعقم (تحتوي على 15 مل من أجار عدد الألواح المذابة أو أي وسائط استزراع قياسية أخرى) من الحمام المائي (45 درجة مئوية).
  2. امسك الزجاجة في اليد اليمنى انزع الغطاء بإصبع اليد اليسرى.
  3. اشعل عنق الزجاجة.
  4. ارفع غطاء طبق بتري قليلاً باليد اليسرى واسكب الأجار المنصهر المعقم في طبق بتري واستبدل الغطاء.
  5. اشعل عنق الزجاجة واستبدل الغطاء.
  6. قم بتدوير اللوح على المنضدة برفق لخلط الثقافة والوسط جيدًا. تأكد من أن الوسيط يغطي اللوحة بالتساوي ولا تنزلق الأجار فوق حافة طبق بتري.
  7. اسمح للأجار بالجل تمامًا دون إزعاجه ، وسوف يستغرق حوالي 10 دقائق.
  8. ختم واحتضان اللوحة في وضع مقلوب عند 37 درجة مئوية لمدة 24-48 ساعة.

الملخصات

Trichophyton mentagrophytes هو عامل مسبب للفطر من فطار جلدي ، يؤثر على البشر في جميع أنحاء العالم. وقد دفع هذا البحث عن منتجات لعلاج هذه العدوى. وفقًا لذلك ، كان الهدف من هذه الدراسة هو التحقق من النشاط المضاد للفطريات لزيت Cymbopogon winterianus الأساسي ضد T. mentagrophytes. تتألف الاختبارات المضادة للفطريات من فحص مضاد للفطريات ، وتحديد MIC و MFC ، وتحليل آثار الزيت العطري على نمو الفطريات ، وإنبات الجراثيم الفطرية ، وحيوية الفطريات ، والتشكل ، وجدار الخلية (اختبار مع السوربيتول) وغشاء الخلية (اختبار تسرب الخلية). ت. عند الغربلة ، قام الزيت بتثبيط جميع السلالات ، مع مناطق تثبيط نمو قطرها 24-28 مم. كان MIC 312 ميكروغرام / مل وكان CFM 2500 ميكروغرام / مل لجميع السلالات التي تم اختبارها تقريبًا. كانت هناك تغيرات شكلية في مجموعة الكونيديا وشكل وتصبغ الخيوط. لا يشتمل العمل المضاد للفطريات للمنتج على جدار الخلية وقد يشمل عمله غشاء البلازما الفطري. استنتج أن زيت C. winterianus الأساسي يشكل منتجًا مضادًا للفطريات ، خاصة لعلاج فطار جلدي.

فطار فطار جلدي Cymbopogon winterianus فطار جلدي Cymbopogon winterianus Dermatophytes

Trichophyton mentagrophytes é um fungo causeador de dermatofitoses، afetando humanos em todo o mundo. Isto direciona a busca de produtos para o tratamento destas infecções. Assim، este estudo to objetivo، an atividade antifúngica do óleo essencial de Cymbopogon winterianus counter T. mentagrophytes. Os ensaios antifúngicos foram configuídos do screening antifúngico، da selectinação CIM e CFM، da análise dos efeitos do óleo essencial no crescimento micelial، na germinação dos esporos، na viabilidade fúngica، na morio ensranese، (إنسايو دي ليز سيليولار) دي تي. لا يوجد فحص ، o óleo inibiu todas as cepas، com zonas de inibição de crescimento de 24-28 mm de diâmetro. CIM foi de 312 ميكروغرام / مل و CFM foi de 2500 ميكروغرام / مل الفقرة quase todas مثل cepas testadas. O óleo Essencial inibiu o desenvolvimento micelial، a germinação dos esporos e a viabilidade fúngica. Houve alterações morfológicas no agrupamento dos conídios، na forma e pigmentação das hifas. ação antifúngica do produto não envolve a parede celular e parece estar encvolvida com a الغشاء الخلوي fúngica. Pode-se concluir que o óleo essencial de C. winterianus se apresenta como um potencial produto antifúngico، especialmente para o tratamento das dermatofitoses.

Trichophyton mentagrophytes Cymbopogon winterianus Cymbopogon winterianus Dermatofitoses Dermatófitos

آثار سيمبوبوجون وينتيانوسزيت Jowitt ex Bor الأساسي على نمو وتكوين داء المشعرات

فيليبي دي أوليفيرا بيريري ، * * المراسلات: F. O. Pereira. Laboratório de Micologia، Departamento de Ciências Farmacêuticas، Centro de Ciências da Saúde، Universidade Federal da Paraíba، 58051-900 Campus Universitário I، Castelo Branco I - João Pessoa - PB، Brasil. البريد الإلكتروني: [email protected] باولو ألفيس واندرلي ثانيًا فرناندو أنطونيو كافالكانتي فيانا ثالثا ريتا بالتازار دي ليما رابعا فريدريكو باربوسا دي سوزا الخامس سقراط جولزيو دوس سانتوس السادس إديلترود دي أوليفيرا ليما أنا

أنا مختبر علم الفطريات ، قسم العلوم الصيدلانية ، مركز العلوم الصحية ، جامعة بارايبا الفيدرالية

المعهد الفيدرالي الثاني للتربية والعلوم والتكنولوجيا ، قسم Sousa-PB

III حديقة النباتات الطبية ، مختبر التكنولوجيا الصيدلانية ، جامعة بارايبا الفيدرالية

المختبر الرابع لعلم النبات ، قسم علم اللاهوت النظامي والبيئة ، مركز العلوم الرياضية والطبيعة ، جامعة بارايبا الفيدرالية

V مختبر الفحص المجهري والصورة البيولوجية ، مركز العلوم الصحية ، جامعة بارايبا الفيدرالية

مختبر السادس للتكنولوجيا الصيدلانية ، جامعة بارايبا الفيدرالية

داء المشعرات هو عامل فطري يسبب فطار جلدي يصيب البشر في جميع أنحاء العالم. وقد دفع هذا البحث عن منتجات لعلاج هذه العدوى. وفقًا لذلك ، كان الهدف من هذه الدراسة هو التحقق من النشاط المضاد للفطريات سيمبوبوجون وينتيانوس من الضروري النفط ضد ت. تتألف الاختبارات المضادة للفطريات من فحص مضاد للفطريات ، وتحديد MIC و MFC ، وتحليل آثار الزيت العطري على نمو الفطريات ، وإنبات الجراثيم الفطرية ، وحيوية الفطريات ، والتشكل ، وجدار الخلية (اختبار مع السوربيتول) وغشاء الخلية (اختبار تسرب الخلية). ت. عند الغربلة ، قام الزيت بتثبيط جميع السلالات ، مع مناطق تثبيط نمو قطرها 24-28 مم. كان MIC 312 ميكروغرام / مل وكان CFM 2500 ميكروغرام / مل لجميع السلالات التي تم اختبارها تقريبًا. كانت هناك تغيرات شكلية في مجموعة الكونيديا وشكل وتصبغ الخيوط. لا يشتمل العمل المضاد للفطريات للمنتج على جدار الخلية وقد يشمل عمله غشاء البلازما الفطري. وخلص إلى أن C. وينتيانوس يشكل الزيت العطري منتجًا محتملًا مضادًا للفطريات ، خاصة لعلاج فطار جلدي.

يونيتيرمز: داء المشعرات/علم الفطريات. فطار جلدي سيمبوبوجون وينتيانوس /زيت أساسي / نشاط مضاد للفطريات. الفطريات الجلدية.

داء المشعرات é um fungo سبب التهاب الجلد ، afetando humanos em todo o mundo. Isto direciona a busca de produtos para o tratamento destas infecções. Assim، Este estudo teve por objetivo Investar a atividade antifúngica do óleo essencial de سيمبوبوجون وينتيانوس كونترا ت. Os ensaios antifúngicos foram concuídos do تحري antifúngico، da selectinação CIM e CFM، da análise dos efeitos do óleo essencial no crescimento micelial، na germinação dos esporos، na viabilidade fúngica، na morfogênese، na parede celular (ensaio comurbitol) e ensaio de celular ت. لا تحري، o óleo inibiu todas as cepas، com zonas de inibição de crescimento de 24-28 mm de diâmetro. CIM foi de 312 ميكروغرام / مل و CFM foi de 2500 ميكروغرام / مل الفقرة quase todas مثل cepas testadas. O óleo Essencial inibiu o desenvolvimento micelial، a germinação dos esporos e a viabilidade fúngica. Houve alterações morfológicas no agrupamento dos conídios، na forma e pigmentação das hifas. ação antifúngica do produto não envolve a parede celular e parece estar encvolvida com a الغشاء الخلوي fúngica. Pode-se concluir que o óleo essencial de C. winterianus حد ذاته apresenta como potencial produto antifúngico، وخاصة علاج الأمراض الجلدية.

يونيتيرموس:داء المشعرات/ ميولوجيا. سيمبوبوجون وينتيانوس/ óleo essencial / atividade antifúngica. جلدي / علاج. ديرماتوفيتوس.

الفطريات الجلدية هي مجموعة من الفطريات المسببة للأمراض والمتخصصة في الركائز الكيراتينية مثل الجلد والشعر والأظافر للإنسان والحيوانات الأخرى التي تنتج فطار جلدي (Weitzman ، Summerbell ، 1995). يؤثر داء الفطار الجلدي على حوالي 40٪ من سكان العالم ويمثل 30٪ من جميع التهابات الجلد الفطرية. نباتات T. من بين الفطريات الجلدية الأخرى ، والإنسان المصاب ، والثدييات والطيور الأخرى. يتم توزيعه في جميع أنحاء العالم ، ويؤثر بشكل رئيسي على فروة الرأس والقدمين واليدين والأظافر والمناطق بين الأصابع. حاليًا ، هي واحدة من أكثر الفطريات الجلدية شيوعًا في البشر (Oyeka ، 2000).

لسوء الحظ ، فإن عدد الأدوية المضادة للفطريات المتاحة لمكافحة فطار جلدي محدود. علاوة على ذلك ، قد تصبح هذه العدوى مقاومة للعلاج ، مما يجعلها غير فعالة (Favre وآخرون.، 2003). زاد حدوث الالتهابات الفطرية بشكل كبير في السنوات الأخيرة ، واتسع نطاق استخدام العوامل المضادة للفطريات بينما زاد ظهور السلالات المقاومة. ومن ثم ، فإن التحقيقات التي تهدف إلى تصميم منتجات جديدة مضادة للفطريات أصبحت ضرورية.

في هذا السياق ، ازداد الاهتمام بالنباتات ذات الخصائص المضادة للفطريات لأنها تمثل مصدرًا واعدًا للمنتجات الجديدة المحتملة. كانت الزيوت الأساسية من النباتات الطبية هي الأكثر استخدامًا في علاج الأمراض المعدية في أجزاء كثيرة من الجسم بما في ذلك الجلد (Rios Recio ، 2004). من المعروف منذ فترة طويلة أن بعض الزيوت الأساسية تستخدم على نطاق واسع في الأنشطة المضادة للميكروبات ، وخاصة في الصناعات الدوائية والصحية ومستحضرات التجميل والزراعية والصناعات الغذائية (البقالي وآخرون.، 2008).

سيمبوبوجون وينتيانوس Jowitt ex Bor (Poaceae) المعروف شعبياً باسم "citronella" أو "java citronella" ، هو عشب معمر يتكون من كتل متماسكة وقوية يبلغ ارتفاعها مترًا واحدًا ، مع استخدام واسع النطاق في الطب الشعبي على ساحل البرازيل. يتم استخدامه كمضاد للفطريات ومبيد للقراد وطارد ضد مجموعة متنوعة من الحشرات (باندي ، راي ، 2003). أجريت هذه الدراسة للتحقق من النشاط المضاد للفطريات C. وينتيانوس من الضروري النفط ، وتحليل آثاره على ت سلالات.

أوراق C. وينتيانوس تم جمعها من مركز التكوين للفنيين في جامعة بارايبا الفيدرالية (الحرم الجامعي الرابع) ، مدينة بانانيراس ، ولاية بارايبا بالبرازيل ، في فبراير 2007. تم الحصول على تعريف نباتي للمصنع وتم إيداع عينة قسيمة (JPB 41387) في المعشبة البروفيسور لورو بيريس كزافييه ، من جامعة بارايبا الفيدرالية.

أوراق طازجة من C. وينتيانوس تم تقطيعها إلى قطع وتعريضها لتقطير الماء باستخدام جهاز Clevenger. تم الاحتفاظ بالزيت العطري الذي تم الحصول عليه (الكثافة = 0.8790 جم / مل) في دورق زجاجة كهرماني وتم الحفاظ عليه عند درجة حرارة أقل من 4 درجات مئوية. تم الحصول على مستحلب الزيت المستخدم في الاختبارات المضادة للفطريات وفقًا للإجراء التالي: 34 ميكرولتر من الزيت العطري ، و 10 ميكرولتر من توين 80 و qs.f. تمت إضافة 3 مل من الماء المقطر المعقم إلى أنبوب معقم ورجها لمدة 3 دقائق باستخدام أداة دوامة ، وبالتالي الحصول على مستحلب مخزون بتركيز نهائي قدره 10000 ميكروغرام / مل. تم إجراء التخفيفات المتسلسلة بنسبة اثنين من أجل الحصول على مستحلبات من 5000-5 ميكروغرام / مل.

ثماني سلالات من ت تم استخدامها في المقايسات المضادة للفطريات. تم الحصول على هذه الفطريات الجلدية من مجموعة مختبر علم الفطريات (LM) ، قسم العلوم الصيدلانية ، مركز العلوم الصحية ، جامعة بارايبا الفيدرالية. تم الحفاظ على الفطريات على أجار دكستروز البطاطس (PDA) - Difco ® - عند 28 درجة مئوية و 4 درجات مئوية حتى إجراءات الاختبار.

لقاحات مخزون ت تم تحضير سلالات من مزارع لمدة 10 أيام في PDA عند 28 درجة مئوية للحث على التبويض. تمت تغطية المستعمرات الفطرية بـ 5 مل من محلول ملحي معقم (كلوريد الصوديوم 0.85٪ وزن / حجم) ، وكشط السطح بلطف بحلقة معقمة ثم تم نقل خليط الوحدات الفطرية الناتج إلى أنبوب معقم. تم توحيد تعكر اللقاح النهائي وفقًا لمقياس McFarland بحجم 0.5 وتم تعديله إلى مجموعة فطرية من 106 وحدات مستعمرة سابقة (CFU). تم تأكيد تقدير اللقاح عن طريق طلاء 0.01 مل من تعليق اللقاح في أجار Sabouraud سكر العنب (SDA). تم تحضين الأطباق عند 28 درجة مئوية وفحصها يوميًا بحثًا عن وجود مستعمرات فطرية تم حسابها بمجرد ظهور النمو (سانتوس) وآخرون، 2006 Hadacek ، Greger ، 2000).

فحص النشاط المضاد للفطريات

تم استخدام طريقة انتشار الوسط الصلب باستخدام أقراص الترشيح الورقية لفحص النشاط المضاد للفطريات (Hadacek، Greger، 2000 Adam وآخرون. ، 1998). تم تحضير أجار Sabouraud dextrose المعقم (SDA) - Difco ® - وتوزيعه بشكل موحد في ألواح بتري المعقمة ، حيث تم تلقيح 1 مل من المعلق الفطري سابقًا. بعد ذلك ، تم نقع أقراص ورق الترشيح (قطرها 6 مم) بالزيت العطري ووضعها على سطح الأجار الملقح. تم تحضين الأطباق عند 37 درجة مئوية لمدة 8 أيام. في نهاية فترة الحضانة ، تم قياس قطر منطقة تثبيط نمو الفطريات والتعبير عنها بالمليمترات. اعتبرت النتائج إيجابية للنشاط المضاد للفطريات حيث كانت القيم المتوسطة لمنطقة تثبيط النمو في اختبارين مستقلين أكبر من أو تساوي 10 مم في القطر.

تحديد الحد الأدنى للتركيز المثبط (MIC)

تم تحديد قيم MIC لسلالات الفطريات التي كانت حساسة للزيت العطري في مقايسة الانتشار المتوسطة الصلبة. تم استخدام اختبار بيولوجي مرق ميكروديلوشن لتحديد MIC من C. وينتيانوس من الضروري النفط (موريرا وآخرون. ، 2010 شاهين وآخرون.، 2004). لهذا الغرض ، تم استخدام 96 طبقًا جيدًا (ذات قاع مسطح) وأغطية. تم تحضير الأطباق التي تضم 96 طبقًا عن طريق صرف 100 ميكرولتر من مرق Sabouraud dextrose (SDB) (Difco ®) في كل بئر. تم وضع حجم 100 ميكرولتر من مستحلب المخزون من الزيت العطري في الآبار الأولى. بعد ذلك ، تم نقل 100 ميكرولتر من التخفيفات التسلسلية إلى آبار متتالية ، باستثناء آخر واحد. الأخير يحتوي على 100 ميكرولتر من المرق الملقح بلقاح فطري لتأكيد صلاحية الخلية (التحكم في الجدوى). تم إجراء التحكم الإيجابي بطريقة مماثلة مع مضادات الفطريات القياسية باستخدام الكيتوكونازول (Sigma-Aldrich ®). في كلتا الحالتين ، تم وضع أعلى تركيز (5000 ميكروغرام / مل) في الآبار الأولى وأقل تركيز (5 ميكروغرام / مل) في الآبار قبل الأخيرة. تم إجراء التحكم في حساسية السلالات المقاسة إلى توين 80 بدون زيت أساسي. تم وضع حجم 100 ميكرولتر من 5 ٪ توين 80 في مرق في الآبار وتم تلقيح 10 ميكرولتر من المعلقات الفطرية في كل بئر. أيضًا ، تم إجراء التحكم في العقم للتحقق مما إذا كانت المرق المستخدم في المقايسة المضادة للفطريات ملوثة قبل إجراءات الاختبار. لهذا ، تم الاستغناء عن 100 ميكرولتر من المرق في بئر ، بدون زيت أساسي أو لقاح.

تم إغلاق جميع الأطباق معقمًا ومعقمًا ثم خلطها على شاكر لوحة (300 دورة في الدقيقة) لمدة 30 ثانية ، وحضنتها عند 28 درجة مئوية وقراءتها بعد 5 أيام من الحضانة. تم تحديد قيم MIC عن طريق الفحص البصري لتثبيط نمو كل بئر مقارنة بئر التحكم (بدون أدوية). تم تعريف MIC على أنه أقل تركيز للزيوت الأساسية قادر على تثبيط نمو الفطريات بنسبة 100٪. تم إجراء الاختبار من نسختين وتم حساب القيم المتوسطة الهندسية (Santos وآخرون., 2006).

تحديد الحد الأدنى لتركيز مبيدات الفطريات (MFC)

تم تحديد MFC بواسطة طريقة microdilution للتحقق مما إذا كان التثبيط قابلاً للعكس أم دائمًا (Denning وآخرون.، 1992 رسولي أبيانة ، 2004). تم نقل قسامات 20 ميكرولتر من الآبار التي لم تظهر نموًا في إجراء MIC إلى 96 طبقًا جيدًا معدة مسبقًا بـ 100 ميكرولتر من SDB. تم غلق الأطباق معقمًا ومعقمًا ثم خلطها على شاكر لوحة (300 دورة في الدقيقة) لمدة 30 ثانية ، وحضنت عند 28 درجة مئوية وقراءتها بعد 5 أيام من الحضانة. تم إجراء الاختبار من نسختين وتم حساب القيم المتوسطة الهندسية. تم تعريف MFC على أنه أقل تركيز للزيت العطري الذي لم يحدث له نمو مرئي عند زراعته في أطباق 96 جيدًا تحتوي على مرق بدون منتجات مضادة للفطريات.

التأثيرات على نمو الفطريات

تحليل تداخل الزيت العطري لـ C. وينتيانوس تم إجراء النمو الفطري عن طريق تحديد الوزن الفطري الجاف لـ ت LM02 (رسولي ، أبينة ، 2004 شارما ، تريباثي ، 2006). تم تلقيح قوارير تحتوي على 2500 و 625 و 312 و 156 ميكروغرام / مل من الزيت العطري في وسط SDB مع تعليق الاختبار ت أضنى. في التحكم المراسل ، تم استبدال نفس الكمية من الزيت العطري بالماء المقطر. تم تحضين النظام عند 28 درجة مئوية لمدة 15 يومًا. من اليوم السادس للحضانة ، تم تحديد الوزن الجاف للميسيليوم كل 3 أيام. تم تصفية القوارير التي تحتوي على mycelia من خلال مرشح Whatman رقم. 1 (احتباس الجسيمات: 11 ميكرومتر) ثم تغسل بالماء المقطر. تم تجفيف الفطريات عند 60 درجة مئوية لمدة 6 ساعات ثم عند 40 درجة مئوية خلال الليل. تم وزن ورق الترشيح المحتوي على الفطريات الجافة من فحصين مستقلين وتم الحصول على القيم المتوسطة. تم حساب تثبيط نمو النسبة المئوية على أساس الوزن الجاف في كل مرة تحليل ، وفقًا لـ Sharma و Tripathi (2006).

مقايسة إنبات البوغ

لتقييم قوة الزيت العطري C. وينتيانوس على إنبات الجراثيم الفطرية ت تم استخدام LM02 ، تركيزات زيت أساسي من 156 ، 312 ، 625 و 2500 ميكروغرام / مل ، عنصر تحكم مع توين 80 (10 ٪ في الماء المقطر) ، وضبط آخر بالماء المقطر. في أنابيب الاختبار المعقمة ، تم خلط 500 مل من CSD مزدوج التركيز بالإضافة إلى الزيت العطري بالتساوي مع 500 مل من معلق الكونيديا الفطرية وحضنت على الفور عند 28 درجة مئوية. تم أخذ عينات من هذا الخليط بعد 24 ساعة من الحضانة لتحليلها. تم إجراء التجربة بأكملها من نسختين ، حيث تم تحديد عدد الكونيديا في غرفة Neubauer وتم حساب نسبة تثبيط إنبات البوغ في كل نقطة زمنية عن طريق مقارنة النتائج التي تم الحصول عليها في التجارب الاختبارية مع نتائج تجربة التحكم. تم إجراء التحليل تحت المجهر الضوئي (Zeiss ® Primo Star) (Rana وآخرون. ، 1997 ليو وآخرون.، 2007).

تم إجراء دراسة الجدوى الفطرية باستخدام الزيت العطري C. وينتيانوس عند 156 و 312 و 625 و 2500 ميكروغرام / مل ، باستخدام طريقة حساب الهياكل الفطرية القابلة للحياة. تم تلقيح حجم 4 مل من CSD بـ 1 مل من المعلق الفطري. ثم تمت إضافة الزيت العطري إلى الكمية اللازمة لتحقيق التركيزات المذكورة سابقًا. تمت إضافة حجم 1 مل من اللقاح ثم الزيت العطري إلى الكمية اللازمة لتحقيق التركيزات المذكورة سابقًا. تم تحضين النظام بأكمله عند 28 درجة مئوية. في فترات زمنية مختلفة (3 ، 6 ، 9 و 12 يومًا) بعد الحضانة ، تم تخفيف قسمة 0.5 مل من الأنابيب في ماء معقم ، وانتشرت على أطباق بتري SDA ، وحضنت عند 28 درجة مئوية لمدة 5 أيام. تم استخدام عنصر تحكم مع توين 80 (10 ٪ في الماء المقطر) وضبط آخر بدون زيت أساسي. تم إجراء حساب عدد المستعمرات القابلة للحياة والتعبير عنها كـ logCFU / mL (Rasooli وآخرون.، 2004).

دراسة التشكل الفطري

تقييم التغيرات الميكرومورفولوجية التي يسببها الزيت العطري لـ C. وينتيانوس في ت تم إجراء LM02 بشكل مكرر بواسطة تقنية ثقافة الشريحة. أولاً ، تم نقل كتلة SDA تحتوي على الزيت العطري (78 ، 156 ، 312 ميكروغرام / مل) إلى وسط شريحة زجاجية في طبق بتري بقطعة من ورق الترشيح. بعد ذلك ، تم أخذ عينة من الفطريات من محيط مستعمرة فطرية عمرها 10 أيام نمت على PDA ، وتم تلقيحها في وسط جوانب كتلة الأجار المتوسطة. تم وضع حوالي 1.5 مل من الماء المعقم في قاع طبق بتري وحضنت عند 28 درجة مئوية لمدة 5 أيام. بعد الحضانة ، تم إصلاح الشرائح ذات الهياكل التناسلية في صبغة لاكتو-فينول-قطن زرقاء وتم ملاحظتها تحت المجهر الضوئي (نموذج أوليمبوس ® CH-30) عند 400 مرة لفحص التشوهات المورفولوجية. تم تسجيل التغييرات الهيكلية التي لوحظت في الفحص المجهري البصري في فحوصات الاختبار ومقارنتها بالنمو الطبيعي الموجود في تجربة التحكم. تم اختبار مقايسة التحكم بدون زيت أساسي بنفس الطريقة (Gunji وآخرون.، 1983 فروست وآخرون.، 1995).

مقايسة حماية السوربيتول

قيم MIC لـ C. وينتيانوس تم تحديد الزيت العطري باستخدام ت سلالات بواسطة إجراء مرق microdilution الموصوف سابقا. تم تحضير أطباق مكررة: احتوى أحدهما على ضعفين من الزيت العطري بينما احتوى الآخر على الزيت العطري بالإضافة إلى 0.8 مولار من السوربيتول كدعم تناضحي ، في كل من الآبار. تمت قراءة MICs في 5 أيام (Escalante وآخرون., 2008).

آثار التسرب الخلوي

الزيت العطري C. وينتيانوس عند 78 ، 156 ، 312 ميكروغرام / مل إلى 10 مل من المعلق الفطري ت LM02 باستخدام أنابيب معقمة. تم استخدام محلول هيدروكسيد البوتاسيوم الكحولي بنسبة 25٪ (مخفف بالإيثانول بنسبة 70٪) كمركب مرجعي ينتج عنه تسرب خلوي بنسبة 100٪. تم استخدام MIC من الأمفوتريسين B (0.60 ميكروغرام / مل) كعنصر تحكم إيجابي. تم تحضين الخلايا عند 28 درجة مئوية ، وأخذت العينات على فترات زمنية (2 و 4 و 24 ساعة) ولفها عند 3000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق في أنابيب الطرد المركزي. تم جمع المواد الطافية لتحليل الامتصاصية عند 260 نانومتر في مقياس الطيف الضوئي فاريان كاري 50. يتم التعبير عن النتائج كوسيلة للنسبة المئوية لقيم التسرب الخلوي من فحصين مستقلين (Escalante وآخرون، 2008 Lunde، Kubo، 2000)

تم إجراء التحليل الإحصائي لدراسة آثار الزيت العطري على الوزن الفطري لتحديد فروق ذات دلالة إحصائية (P & lt0.05) باستخدام تحليل التباين (أحادي الاتجاه ANOVA) باستخدام اختبار Kruskal- Wallis ، متبوعًا باختبار Dunn post- اختبار. لهذا ، تم تنفيذ التحليل الإحصائي باستخدام GraphPad Prism الإصدار 4.03 لنظام التشغيل Windows ، سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية.

نتائج ومناقشة

نتائج نشاط مضاد للفطريات C. وينتيانوس من الضروري النفط ت السلالات موضحة في الجدول الأول. الزيت العطري في ناتورا كان قادرًا على تثبيط جميع السلالات المختبرة بأقطار مناطق تثبيط من 24 إلى 28 مم. تم تلخيص قيم MIC أيضًا في الجدول الأول. كما يمكن رؤيته ، كان MIC من الزيت العطري 312 ميكروغرام / مل لجميع السلالات المقالة ، باستثناء واحدة. كانت أدنى قيمة MIC 156 ميكروغرام / مل لـ ت إل إم 07. أظهر الكيتوكونازول MIC أقل من الزيت العطري ، حيث كانت قيم MIC 78 و 156 و 312 ميكروغرام / مل للكيتوكونازول. أظهرت نتائج الضبط عدم وجود تثبيط نمو الفطري بنسبة 80 في المائة ، في حين تم الكشف عن نمو الفطريات في المرق دون إضافة الأدوية (التحكم في العقم). كان تأثير مبيدات الفطريات أقوى ل ت LM07 ، يتضح من أقل قيمة MFC تبلغ 1250 ميكروغرام / مل. كانت قيم MFC أعلى بنحو ثمانية أضعاف من MIC لجميع السلالات المختبرة. ومع ذلك ، كان MFC للكيتوكونازول أعلى بنحو ستة عشر مرة من قيم MIC (1250-5000 ميكروغرام / مل).

من المعروف منذ فترة طويلة أن بعض الزيوت الأساسية لها خصائص مضادة للميكروبات والتي من المحتمل أن تكون مرتبطة بوظيفة هذه المركبات في النباتات (بيرت ، 2004). في وقت سابق ، تبين أن هذا الزيت العطري يُظهر تأثيرًا مضادًا للميكروبات ضد الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض المختلفة للإنسان والنبات ، كونه مفيدًا في السيطرة على أمراض الفطريات في المزارع الكبيرة ، بالإضافة إلى نشاطه كطارد ومبيد للحشرات (سيميك وآخرون.، 2008 دي بلاسي وآخرون.، 1990).أفادت الدراسات السابقة أن السترونيلال والجيرانيول أظهروا نشاطًا مضادًا للفطريات Aspergillus niger ، fusarium oxysporum و البنسليوم ديجيتاتوم (موليار ، ناراسيمهام ، 2004). ومع ذلك ، توجد معلومات شحيحة عن تأثيرات C. وينتيانوس زيت أساسي ضد الفطريات المهمة الكلاسيكية المتورطة في العدوى البشرية ، بما في ذلك أنواع الفطريات الجلدية.

آثار ال C. وينتيانوس يتم التعبير عن الزيت العطري على نمو الفطريات كنسبة مئوية من تثبيط الوزن الفطري الجاف لـ ت LM02 والموضح في الشكل 1. كشفت هذه الدراسة أن جميع تركيزات الزيت العطري تمنع تطور الفطريات. في كل نقطة زمنية منفصلة ، اختلفت جميع التركيزات المختبرة (P & lt0.05) عن نتائج 156 ميكروغرام / مل. أيضًا ، عند 156 ميكروغرام / مل ، زاد إعاقة نمو الفطريات مع وقت التفاعل بين الخلايا الدوائية والفطرية. مع التركيزات الأخرى من الزيت العطري ، كان هناك تثبيط بنسبة 100٪ في جميع الأوقات التي تم تحليلها. تنتج الفطريات الجلدية خيوطًا يمكنها اختراق الطبقة الأعمق من الجلد وتفاقم الضرر في العائل (Zurita ، Hay ، 1987). لذلك ، يدرس بعض الباحثين إمكانات الزيوت الأساسية في تثبيط النمو الفطري للفطريات المسببة للأمراض ، نظرًا لأهميتها في تطور الفطار.

نسبة تثبيط إنبات الكونيديا ت ينتج LM 02 عن تركيزات مختلفة من الزيت العطري C. وينتيانوس يتم عرضها في الشكل 2. بشكل عام ، تمارس جميع تركيزات الزيت العطري تأثيرًا مثبطًا قويًا على إنبات كونيديا السلالة المختبرة. مع زيادة تركيز الزيت العطري من 156 إلى 625 ميكروغرام / مل ، زادت نسبة التثبيط أيضًا ، لتصل إلى قيم قريبة من 100٪. على الرغم من أن هذه النتائج ذات صلة عدديًا ، إلا أن غياب الكونيديا النابتة في الثقافة ، مما يشير إلى تثبيط الإنبات الكلي ، لوحظ فقط عند 2500 ميكروغرام / مل. بمقارنة هذه النتائج ، يُلاحظ أن نسبة التثبيط لـ 156 و 625 ، 2500 ميكروغرام / مل كانت مختلفة اختلافًا كبيرًا (P & lt0.05) ، مما يدعم فكرة أن التركيز المتزايد يعزز بطريقة ما التأثير المثبط على الإنبات. أخيرًا ، وجد أن توين 80 لم يؤثر على إنبات الكونيديا. نظرًا لأهمية إنبات الجراثيم المناسبة في التسبب في الإصابة بفطريات الجلد ، فإن التداخل في العملية الناجم عن الزيت العطري يثبت أنه ذو صلة لأن هذا المنتج ثبت أنه أداة واعدة للتدخل في هذه العملية المعدية.

يوضح الشكل 3 النتائج المتعلقة بتأثيرات الزيت العطري C. وينتيانوس حول جدوى ت LM 02. بعد التحليل الإحصائي ، لوحظ أن القيم اختلفت (P & lt0.05) في كل مرة يتم فيها تحليل التفاعل. يمكن رؤية هذه الملاحظات من خلال قيم logCFU / mL للزيت الأساسي التي تكون دائمًا أقل من تلك التي لوحظت في تجربة التحكم. كان الزيت العطري عند 312 ميكروغرام / مل قادراً على تقليل قابلية الفطريات على مدار فترة التجربة ، ووصل إلى 100 ٪ من تثبيط قابلية الفطريات من تسعة أيام من التفاعل. عند 156 ميكروغرام / مل ، كان هذا التأثير واضحًا أيضًا ، على الرغم من الحاجة إلى فترة تفاعل أطول بين الزيت والفطريات (12 يومًا من التعرض). ومع ذلك ، من الملاحظ أنه في أعلى التركيزات ، فشلت الفطريات في التطور من اليوم الثالث من التفاعل ، مما يجعل الظروف غير عملية تمامًا للنمو. لم يؤثر توين 80 على قابلية الفطريات.

منحنيات الوفيات الفطرية حساسة بدرجة كافية كاختبار مصمم للقياس الديناميكي لقدرة المركب على العمل على جدوى كائن حي دقيق. يمكن أيضًا الاستدلال على تقدير معدل الوفيات في الهياكل الفطرية لتركيز معين من مركب مضاد للميكروبات ، مما يوضح سرعة تأثير مبيد الفطريات أو مدة التأثير الفطري (Burt ، 2003 Cantón Pemán ، 1999). وهكذا ، وبالنظر إلى النتائج التي تم الحصول عليها ، تم تأكيد تأثير مبيد للفطريات لجميع تراكيز الزيت العطري C. وينتيانوس، تختلف فقط في الوقت اللازم لإظهار هذا التأثير.

ملاحظات ت تم فحص LM02 تحت مجهر ضوئي بمعدل تكبير 400 × بعد التعرض له C. وينتيانوس أظهر الزيت العطري بعض التشوهات المورفولوجية (الشكل 4). تسبب الزيت العطري في حدوث تغييرات مماثلة في جميع التركيزات ولكنه زاد بشكل ملحوظ عند زيادة تركيز الزيت. على الرغم من أن شكل ت لم تتغير الكونيديا ، وتعرضت مجموعتها النموذجية لأضرار بالغة وتبين أنها مبعثرة للغاية في جميع تركيزات الزيت العطري المستخدم. غالبًا ما كانت الغالبية العظمى من الواصلة أوسع من الواصلة العادية ، مع خسائر كبيرة في التصبغ ووجود فجوات موزعة على نطاق واسع داخلها (الشكل 4 ج ، د). أظهر الفحص المجهري لفطيرة التحكم (الخلية غير المعالجة) بنية خلوية منتظمة مع سيتوبلازم متجانس ، وكونيدات وفيرة ، وخيوط حاجزة طويلة وواضحة ، مع ميكروكونيدية مستديرة للغاية متجمعة على كونيديوفورات متفرعة. كان عدد قليل من macroconidia موجودًا كمرفقات على شكل سيجار ، رقيقة الجدران وضيقة للخيوط (الشكل 4 أ ، ب). تؤثر النتائج الواردة في هذا التقرير بشكل مباشر على التسبب في المرض ، حيث أن فطار جلدي يعتمد على قدرة التكوُّن الطبيعية للفطريات ونموها في موضع العدوى.

قد تكون هذه التعديلات في التشكل الفطري مرتبطة بتداخل الزيت العطري مع الإنزيمات المسؤولة عن التوليف أو الحفاظ على جدار الخلية الفطرية ، كما ذكر سابقًا باحثون آخرون ، مما يضعف النمو الطبيعي وتشكل الخلايا (Debillerbeck) وآخرون. 2001 جونجي وآخرون.، 1983).

بالنظر إلى التداخل المحتمل للزيت العطري على جدار الخلية الفطرية ، تم اختبار الزيت في فحص حماية السوربيتول كامل الخلية. في هذا الاختبار ، يمكن أن تنمو الخلايا المحمية من السوربيتول في وجود منتجات مثبطة لجدار الخلية الفطرية ، بينما يُثبط نموها في حالة عدم وجود السوربيتول. يتم الكشف عن هذا التأثير من خلال زيادة قيمة MIC التي تم الحصول عليها مع السوربيتول مقارنة بقيم MIC بدون السوربيتول (Svetaz وآخرون. ، 2007). كانت قيم MIC في كلتا التجربتين متطابقة ، مما يشير إلى ذلك C. وينتيانوس لا يعمل الزيت العطري من خلال تثبيط تخليق أو تجميع جدار الخلية الفطرية.

سمة مهمة من سمات C. وينتيانوس الزيت العطري والمواد الكيميائية النباتية الخاصة به (مثل أحادي التربينات) هي نقيضها للماء ، وبالتالي يمكن أن تتفاعل مع الغشاء الفطري ، وتتدخل في سلامتها. يمكن الكشف عن هذا الضرر الذي لا رجعة فيه عن طريق قياس مواد ماصة 260 نانومتر تم إطلاقها إلى الوسط ، والتي تمثل بشكل أساسي النيوكليوتيدات ، والتي أظهرت المركبات المحتوية على اليوراسيل أقوى امتصاص في فترات زمنية مختلفة (2 و 4 و 24 ساعة). تم استخدام الأمفوتريسين ب كعنصر تحكم إيجابي لأنه يمكن أن يتعقد مع إرغوستيرول في الأغشية الفطرية ، مما يضر بوظيفة الحاجز لدرجة التسبب في تسرب المحتويات الخلوية (الاحتمالات وآخرون.، 2003). أظهرت النتائج أن الزيت العطري والأمفوتريسين B أنتجا تسربًا خلويًا بنسبة 100 ٪ في 4 ساعات من التفاعل ، كما هو موضح في الجدول 2. على الرغم من أن النتيجة التي تم الحصول عليها من MIC للزيت العطري كانت أعلى من MIC للتحكم الإيجابي في ساعتين ، كان كلاهما متشابهًا إحصائيًا.

هذه النتائج تؤكد أن النشاط المضاد للفطريات C. وينتيانوس يرتبط الزيت العطري بالتدخل في سلامة ووظيفة ت غشاء الخلية. نظرًا للطبيعة المحبة للدهون للزيوت الأساسية ، يمكنها تقسيم الأغشية الفطرية إلى دهون مما يجعلها أكثر نفاذاً ، مما يضر بسلامتها ويتسبب في النهاية في موت الفطريات (Sikkema وآخرون.، 1995 كوكس وآخرون.، 2000 بيرت وآخرون.، 2004). لذلك ، يمكن اعتبار النتائج التي تم العثور عليها في هذه الدراسة ذات صلة وواعدة. في الختام ، تدعم هذه النتائج الاستخدام الرشيد لـ C. وينتيانوس زيت أساسي لتثبيط نمو الفطريات الجلدية. بالإضافة إلى، C. وينتيانوس يمكن أن يؤدي الزيت العطري إلى تطورات مستقبلية تنطوي على استخدامه الرشيد المحتمل لعلاج فطار جلدي.

يود المؤلفون أن يشكروا CNPq (Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - Brazil) على المنح والزمالات.


شاهد الفيديو: مكافحة اعفان الجذور في محصول البطاطس وطرق الوقاية والعلاج (شهر فبراير 2023).